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Wako氨基酸混合标准溶液

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Wako氨基酸混合标准溶液

日立氨基酸分析仪(Hitachi)在国内应用较为普遍，主要使用的型号为L-8500型，L-8500A型，L-8800型，L-8900型等多种型号，采用柱后衍生、用茚三酮显色液作为衍生试剂的离子交换色谱法,,配套缓冲液作为洗脱试剂的工作方式。日立本身并不生产试剂，其仪器的配套试剂都是由日本的两家大型化学试剂生产商(和光WAKO 和 三菱 MCI)为其生产。不论是什么型号的配套试剂，基本都分3大部分： 1. 缓冲液; 2. 再生液; 3. 显色液，而氨基酸标准品亦是色谱分析试剂必不可少的组成部分。
013-08391 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H
氨基酸混合标准溶液, H型		 5ml 470
019-08393 1ml*5 710
015-14461 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2
氨基酸混合标准溶液, AN-2型		 5ml 700
015-14461 1ml*5A 1030
016-08641 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B
氨基酸混合标准溶液, B型		 5ml 700
015-14461 1ml*5A 1030

氨基酸混合标准

Wako 013-08391氨基酸混合标准溶液,H型

货号：013-08391
包装：5mL

英文名：Amino Acids Mixture Standard Solution， Type H

级别：氨基酸分析

品牌：Wako

氨基酸混合标准溶液,H型 (013-08391)，含有17种常用的氨基酸和谷氨酸和谷氨酰胺水解形成的氯化铵，用于氨基酸分析仪或高效液相色谱(HPLC)进行氨基酸成分分析或者测序。

氨基酸标准溶液, H型, 013-08391, 5mL
本产品含有17种常用的氨基酸和谷氨酸和谷氨酰胺水解形成的氯化铵，用于氨基酸分析仪或高效液相色谱(HPLC)进行氨基酸成分分析或者测序。
两种AN-2型氨基酸混标
Wako货号
品名
包装
货期
013-08391
Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H
氨基酸混合标准溶液, H型
5ml
2-3周
019-08393
1mLx5A
2-3周
组成（每种氨基酸浓度2.50 微摩尔/毫升，溶于约0.1摩尔/升盐酸溶液中）
L-Asp, L-天门冬氨酸；
L-Thr, L-苏氨酸；
L-Ser, L-丝氨酸；
L-Glu, L-谷氨酸；
L-Pro, L-脯氨酸；
Gly, 甘氨酸；
L-Ala, L-丙氨酸；
L-Cys, L-胱氨酸；
L-Val, L-缬氨酸；
L-Met, L-蛋氨酸；
L-Ile, L-异亮氨酸；
L-Leu, L-亮氨酸；
L-Tyr, L-酪氨酸；
L-Phe, L-苯丙氨酸；
L-Lys, L-赖氨酸；
L-His, L-组氨酸；
L-Arg, L-精氨酸；
Ammonium Chloride, 氯化铵；
注意事项:
1. 1ml*5A包装为5只1ml装安瓿瓶, 5ml包装为旋口瓶, 2-10度保存
2. 每个安剖中含约1.2毫升
3. 2-10度保存
4. 本产品仅供科研使用，请勿用于人体。

WAKO表面湿润张力试验用混合液(表面张力测试液，Wetting Tension Test Mixture）

发表于由
WAKO表面湿润张力试验用混合液(表面张力测试液，Wetting Tension Test Mixture）
用途：用于表面润湿张力测试
外观：蓝色液体
WAKO表面湿润张力试验用混合液(表面张力测试液,Wetting Tension Test Mixture）WAKO表面湿润张力试验用混合液(表面张力测试液,Wetting Tension Test Mixture）WAKO表面湿润张力试验用混合液(表面张力测试液,Wetting Tension Test Mixture） 危险
保存：避光
润湿是液体通过膜表面扩张的一种现象。表征湿润程度的系数称为张力。对于用于塑料薄膜的油漆或涂料，或塑料薄膜的粘合剂而言这点很必要，塑料薄膜能够附着油墨、涂料和粘合剂。润湿张力用来度量这种附着能力。
20140610FH6048F0B0
（图1）在水一样表面张力强的液体里，要浸润表面，需要薄膜表面有亲水性（极性高）。
涂装、涂层、粘合塑料薄膜时，要求薄膜上的油墨、涂层剂、粘合剂能浸润薄膜，其浸润程度用表面润湿张力作标尺。薄膜表面有水珠时，不能说是被浸润。反之，像有机溶剂一样表面张力弱的溶剂，就算薄膜表面会弹水也一样可以浸润。 因此，涂装、涂层、粘合塑料薄膜时，需要知道塑料薄膜的润湿张力。
JIS K6768中已明确了润湿张力的检测方法。为了和ISO国际标准相匹配，该检测方法已经根据ISO 8296进行了彻底的修订。在修订版中，增加了多种测试用的液体混合物，应用范围也从聚乙烯和聚丙烯拓展到常规的塑料薄膜和片材。
根据日本工业标准K6768修订版，16种新型的润湿张力测试标准溶液，润湿系数从22.6到30.0以及从56.0到73.0，加入到传统的润湿系数标准溶液体系中。产品已经更新，上海金畔生物能够为您提供36种混合液，用于表面润湿张力测试。
（注）由于使用了质量更稳定的着色剂，色调与传统产品略有差异。但对于使用无害。
表面湿润张力的定义
按编号顺次在塑料薄膜上涂上一系列表面湿润张力不同的混合液，使其恰好湿润薄膜，由此判定混合液表面湿润张力（μN/cm）{dyn/cm2}的数值。 单位mN/m表示这种表面湿润张力的数值，即试剂名所标记的No．。例如NO.31的表面湿润张力是31mN/m (310μN/cm)* dyn/cm=1mN/m (=10μN/cm) （SI单位的统一）
20120529164725_9025
（图2）
表面润湿张力的简便的试验方法
■ 用含有试剂的棉棒在试验材料（薄膜）上横向涂抹一次，请注意涂上的混合液的量会极大影响试验的正确度。
○涂抹量过多 
液膜没有从内部破裂，液滴四周收缩形成水珠。（检测值会变大）
○涂抹量刚好 
涂抹的液膜四周相中间都破裂。
○涂抹量过少 
涂抹时液膜中断，出现涂抹不均匀现象。（检测值会变小）
■ 涂上试剂后2秒，判定液膜中央部分的状态。当液膜没有产生破裂时，判定为“可润湿”，如图(2)所示 ；产生破裂时，判定为“不可润湿”。
上海金畔生物能够为您提供表面湿润张力测试混合液 Wetting Tension Test Mixture ( 36种 )，用于表面润湿张力测试。
品名
货号
包装
表面湿润张力测试剂 NO.22.6
235-01791
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.25.4
238-01801
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.27.3
235-01811
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.30.0
232-01821
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.31.0
239-01831
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.32.0
236-01841
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.33.0
233-01851
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.34.0
230-01861
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.35.0
237-01871
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.36.0
234-01881
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.37.0
231-01891
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.38.0
234-01901
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.39.0
231-01911
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.40.0
238-01921
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.41.0
235-01931
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.42.0
232-01941
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.43.0
239-01951
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.44.0
236-01961
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.45.0
233-01971
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.46.0
230-01981
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.48.0
237-01991
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.50.0
234-02001
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.52.0
231-02011
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.54.0
238-02021
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.56.0
235-02031
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.58.0
232-02041
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.59.0
239-02051
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.60.0
236-02061
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.61.0
233-02071
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.62.0
230-02081
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.63.0
237-02091
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.64.0
230-02101
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.65.0
237-02111
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.67.0
234-02121
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.70.0
231-02131
50 mL
表面湿润张力测试剂 NO.73.0
238-02141
50 mL

BAMBANKER无血清细胞冻存液

发表于由

BAMBANKER无血清细胞冻存液

品牌： Wako
货号： 302-14681
CAS号： 无
供应商： 上海金畔生物
数量： 1
保存条件： 2-10℃
规格： 120ml

BAMBANKER无血清细胞冻存液

BAMBANKER是一种无血清细胞冻存液。可在-80℃长期保存细胞（肿瘤细胞和常规细胞）。

1114708962864899.jpg

◆产品特性●  即用型细胞冻存液●  无需分步降温，直接使用●  无需稀释●  无需程序降温盒●  -80℃长期保存●  无血清◆无血清冻存液的优点　　与含血清类型相比，批次间的成分组成差异小，可保持稳定的品质。　　不含血清，因此没有因动物源的未知成分和感染物质所产生的影响与风险。　　可对无血清驯化细胞进行冷冻，节省再驯化步骤。◆操作流程　　1）收集对数生长期的细胞（5×105-1×107个细胞）　　2）用1mL该细胞冻存液悬浮细胞，置于冻存管中，不需预冷，直接-80℃冷冻保存，也可用液氮快速冷冻细胞　　3）用恒温箱或者水浴锅快速复苏细胞　　　　*冷冻细胞必须处于对数生长期
blob.png◆无菌检测**　　内毒素：生色底物法　　支原体：荧光抗体法　　真菌和细菌：依据日本药典　　（**：可索取检验证书）BAMBANKER® Direct　　BAMBANKER Direct是“无血清型”细胞冻存液。◆BAMBANKER®
Direct无需离心收集细胞blob.png
①不需冻存前预处理，操作简便②不需稀释，直接使用③无需分步降温，直接使用④可快速、长期冻存细胞（-80℃或液氮）⑤不含血清02.jpg◆BAMBANKER® Direct冻存步骤VS常规冻存步骤　　使用本产品无需经过离心等复杂步骤，只需往培养基内添加与培养液等量的BAMBANKER Direct，再分装到冻存管，置于-80℃便可冻存细胞。
◆应用【BAMBANKER使用例】

 细胞名称 保存时间 生存率
  BAMBANKER 公司A（含血清) 公司A（不含血清）
P3U1 12个月 95% 95% 70%
（小鼠骨髓瘤细胞系）
K562 12个月 73% 70% 60%
（人白血病细胞系）
人体胃黏膜上皮细胞 10个月 100% 62% 56%
human γδT cells 10个月 65% 37% 35%
（人γδT细胞）
 Daudi 12个月 100% 100% 92%
（人 B细胞系）
PC12 11个月 95% 59% 20%
（大鼠源肾上腺嗜铬细胞瘤）
human B cell line 9个月 74% 54% 35%
（人B细胞系）
OKT4 12个月 100% 100% 92%
（小鼠杂交瘤细胞）
B细胞系 10个月 56% 40% 18%
(猴）

【低温冻存实验证明以下细胞保存完好】

3T3‐L1（小鼠前脂肪细胞系） A431（人扁平上皮癌细胞系） BAEC（牛主动脉血管内皮细胞系）
Balb/3T3（小鼠成纤维细胞系） C2C12（小鼠骨骼肌细胞系）  Daudi（人 B细胞系）
ECV304（人脐静脉内皮细胞系） H295R（肾上腺皮质细胞） HEK293（人胎儿肾细胞系）
HEK293T（人胎儿肾细胞系） HeLa（人子宫颈癌细胞系） HeLa S3（人子宫颈癌细胞系）
HepG2（人肝癌细胞系） HFF（人正常成纤维细胞系） Huh7（人肝癌细胞系）
Jurkat（人白血病T细胞系） K562（人慢性骨髓性白血病细胞系） KATOIII （人胃癌上皮细胞系）
KLM‐1（人胰腺癌细胞系） MDCK（犬肾小管上皮细胞系） MEF（小鼠胚胎成纤维细胞）
NIH3T3（小鼠胎儿皮肤细胞） OKT4（小鼠杂交瘤细胞） OP9（小鼠骨髓基质细胞）
P3U1（小鼠骨髓瘤细胞系） PANC‐1（人胰腺癌细胞系） PC12（大鼠源肾上腺嗜铬细胞瘤）
RPE（人细膜上皮细胞系） SNL（小鼠胚胎成纤维细胞） TSU‐Pr1（人前列腺癌细胞系）
Vero（非洲绿猴肾细胞系） human γδT cells （人γδT细胞） human B cell line （人B细胞系）
猴B细胞系 人外周血活化淋巴细胞 永生化人肌肉细胞
小鼠脾脏活化淋巴细胞 小鼠ES细胞系 人胃上皮细胞

ES细胞（小鼠）使用实例。

T.Hikichi,et al; Differentiation Potential of Parthenogenetic Embryonic Stem Cells Is Improved by Nuclear Transfer, Stem Cells, 2007, 25, 46-53
产品编号 产品名称 产品规格
302-14681 BAMBANKER
BAMBANKER冻存液		 120mL
306-14684 BAMBANKER
BAMBANKER冻存液		 20mLx5
306-95921 BAMBANKER Direct
BAMBANKER直接冻存液		 20m

WAKO 亲和层析法纯化磷酸化蛋白–Phos-tag 琼脂糖

发表于由

WAKO 亲和层析法纯化磷酸化蛋白–Phos-tag 琼脂糖

Phos-tagTM与琼脂糖（Agarose）结合利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合，纯化磷酸化蛋白。  Phos-tag™ Agarose可用于磷酸化蛋白通过柱层析富集，分离，纯化。不使用表面活性剂或还原剂，磷酸化蛋白可以在一个类似体内环境下获得。

Phos-tag™ Agarose为分离、浓缩天然磷酸化的蛋白和生物样品（生理条件下）中磷酸化多肽提供一种高效的方法。

特点：

  • 缓冲液不含有还原剂和去污剂
  • 与亲和层析方法类似
  • 可在1小时内纯化磷酸化蛋白
  • Phos-tag™ Agarose捕获结合到Tyr、Thr、Ser、Asp、His等氨基酸、糖类、脂类上的无机磷酸根和大量二价磷酸根
  • 蛋白可在生理条件（PH7.5）下捕获
  • 无需表面活性剂和还原剂

WAKO 亲和层析法纯化磷酸化蛋白–Phos-tag 琼脂糖说明书下载

Phos-tag Agarose AG-501  [Wako Cat. #302-93561 (0.5 mL)]⇒ Protocol（点击进入下载）


Phos-tag Agarose AG-503  [Wako Cat. #308-93563 (3 mL)]⇒ Protocol点击进入下载）

 

Phos-tag™ Agarose亲和层析原理

应用实例
【纯化细胞裂解液中的磷酸化蛋白】

 M：标准蛋白Marker
Lane 1：全蛋白，未经纯化
Lane 2：纯化后的蛋白洗脱液
Lane 3：漂洗流出液
将Phos-tag™ Agarose填充到柱子中，加入细胞裂解液。

SYPRO Ruby染色（左图），Anti-pTyr抗体进行western blot检测（右图）。
结果显示使用Phos-tag™ Agarose可高效纯化磷酸化蛋白。

产品编号 产品名称 规格 原价
308-99401 Phos-tag™ Agarose 0.5ml 2700
308-93563 Phos-tag™ Agarose 3ml 17440
产品描述

1、悬浮液填料；

2、悬浮液在4度中，可保存至少半年；

3、Phos-tagTM与琼脂糖（Agarose）结合利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合，纯化磷酸化蛋白。

可用于亲和层析法进行磷酸化蛋白纯化。

Phos-tag® Agarose为分离、浓缩天然磷酸化蛋白和生物样品中磷酸化多肽提供一种高效的方法。

提供各种规格产品，以便用于不同样品的检测。

缓冲液不含有还原剂和去污剂。与亲和层析方法类似。

Phos-tag® Agarose捕获结合到Tyr、Thr、Ser、Asp、His等氨基酸，糖类、脂类上的无机磷酸根和大量二价磷酸根。

 

wako 用于磷酸化蛋白的WB检测– Phos-tag™ Biotin

发表于由

wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag，用于磷酸化蛋白的WB检测

Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™，可代替western blot检测中的磷酸化抗体。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白。现推出液体型。

特点：

  • 无辐射
  • 无需PVDF膜的封闭处理
  • Phos-tag™的特异性结合与氨基酸种类、序列无关
  • 可适用于免疫印迹和质谱分析等后续工作
  • Phos-tag™-BTL母液可稳定保存至少6个月
  • 实验流程与使用HRP标记抗体相类似
  • 可用于所有的磷酸化蛋白检测
  • 与普通WB检测相似。但无需使用磷酸化抗体
【Phos-tag™ Biotin免疫印迹原理】
应用实例：

应用实例：使用Phos-tag™BTL-104进行斑点印迹检测
非磷酸化蛋白：Bovine Serum Albumin, Human Serum Albumin, Carbonic Anhydrase, β- Galactosidase
磷酸化蛋白：α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
去磷酸化蛋白： (用碱性磷酸酶处理) α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
Application (3): Western Blotting:
Phos-tag Biotin BTL-104 [Wako Cat. #301-93531 (10 mg)]⇒ Protocol（点击进入）

Phos-tag Biotin BTL-105 [Wako Cat. #304-93541 (10 mg)]⇒ Protocol（点击进入）
产品描述

1、粉末；

2、在4度可保存至少一年；

3、检测磷酸化蛋白；

4、Phos-tagTM与生物素（Biotin）结合可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。

可用于免疫印迹实验，二维电泳。

产品编号 产品名称 规格 原价
305-99411 Phos-tag™ Biotin BTL-104 1mM Aqueous 0.3ml 2700
308-97201 Phos-tag™ Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml 3560
301-93531 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg 12460
308-93541 Phos-tag™ Biotin BTL-105 10mg 12460

BTL-104、BTL-105、BTL-111三者连接链（Linher)长度不一，但使用上基本相同.BTL-111灵敏度最高，推荐使用溶解性比较高的BTL-104。

wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag使用的先关问题解答

wako 193-16711-SuperSep Phos-tag™ 预制胶

发表于由

wako 193-16711-SuperSep Phos-tag™ 预制胶（蛋白磷酸化研究）

蛋白磷酸化研究的预制胶

新品速递图wako.jpg

SuperSep Phos-tag

SuperSep Phos-tag是研究蛋白磷酸化的方法，无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记。

◆SuperSep Phos-tag

blob.png

Phos-tag?是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phostag? Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中心凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的带条结果也很整齐。

磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白作为不同条带分离。

分离后，胶可用于考马斯亮蓝染色，免疫印迹和质谱实验。

◆Phos-tag SDS-PAGE 的原理

blob.png

◆在HighWire Search 上搜索到的论文数

blob.png

◆运用

利用p35的丙氨酸突变体确定Cdk5 激活p35的磷酸化位点

p35常见的磷酸化位点是Ser8和Thr138。但是Ser8和Thr138位点往往会发生丙氨酸突变，产生3种突变体（Ser8突变体：S8A，Thr138突变体：T138A，Ser8和Thr138双突变体：2A）。这3种突变体、野生型p35、Cdk5和没有激酶活性的Cdk5都来源于COS-7细胞。这些细胞裂解液用Phos-tag? SDS-PAGE和Western blotting 进行检测（检测抗体：p35抗体）。

blob.png

100 μM Phos-tag ? 丙烯酰胺, 7.5% 聚丙烯酰胺凝胶

可明确磷酸化位点和条带迁移率的关系！

– 泳道1（条带L2和L4）和泳道5（条带M1）：p35在Cdk5的作用下发生了磷酸化；

– 泳道1（条带L2和L4）和泳道3（条带L2和L4）：在无激酶活性Cdk5的作用下，大约有一半p35蛋白在Thr138位点

发生磷酸化，同样在138位发生突变的p35蛋白亦是如此。

– 泳道5 （条带M1）和泳道6（条带L3和L4）：Ser8和Thr138是主要的磷酸化位点；

– 泳道5（条带M1）、泳道7（条带L1和L2）和泳道8（条带M2）：条带M1是Ser8和Thr138都发生磷酸化的条带；

条带M2是只有Ser8磷酸化的条带；条带L1和L2是只有Thr138磷酸化的条带。

※ 条带L1和L3中的X 是不确定哪个位点发生磷酸化的条带；

※ 条带L4是非磷酸化的p35。

【参考文献】

Quantitative Measurement of in Vivo Phosphorylation States of Cdk5 Activator p35 by Phos-tag ? SDS-PAGE. T. Hosokawa, T. Saito, A. Asada, K. Fukunaga, and S. Hisanaga,Mol. Cell. Proteomics, Jun 2010;9: 1133 – 1143.

【结果提供】

理化学研究所 脑科学综合研究中心 回路功能研究核心 记忆功能研究团队 细川智永（Dr. T. Hosokawa）

首都大学东京 理工学研究科 生命科学专业 神经分子功能研究室 久永真市（Dr. S. Hisanaga）

检测含有Dnmt1磷酸化激酶的片段

blob.png

我们可以确定在片段中含有目的激酶！

① 采用亲和色谱法从鼠脑提取液中纯化GST-Dnmt1（1-290）结合蛋白

② 使用0.3 M 和1 M NaCl 的DNA 纤维素柱洗脱得到目的蛋白

③ GST-Dnmt1（1-290）作为体外激酶实验的反应底物

④ Phos-tag  SDS-PAGE 用于Western blotting，确定迁移条带中每个片段的激酶活性

【参考文献】

The DNA-binding activity of mouse DNA methyltransferase 1 is regulated by phosphorylation with casein kinase 1delta/epsilon. Y. Sugiyama, N. Hatano, N. Sueyoshi, I. Suetake, S. Tajima, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and I. Kameshita, Biochem. J.,

【结果提供】

高知大学 综合研究中心 生命、功能物质部门 实验实习机器设施 杉山康宪（Dr. Y. Sugiyama）

香川大学 农学部 应用生物科学科 动物功能生化学研究室 龟下勇（Dr. I. Kameshita）

二维电泳中的应用：分析hnRNP K磷酸化异构体

小鼠巨噬细胞J774.1 经LPS 刺激后，裂解细胞，经过免疫沉淀法分离得到hnRNP K。在二维电泳中，一维是IPG 胶，二维是Phos-tag ? SDS-PAGE，可分离hnRNP K 的异构体。利用质谱仪，可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。

blob.png

同一个等电点的位置上，不同位点发生磷酸化都可以被区分开来

（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）

【参考文献】

? Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics, Nov 2010; 10(21): 3884-95.

【结果提供】

横滨市立大学 生命纳米系统科学研究科 生物体超分子系统科学专业 木村弥生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）

理化学研究所RCAI 小原收

◆备注

样品制备：

Phos-tag SDS-PAGE对于蛋白样品中的杂质非常敏感，尤其是螯合剂，钒酸，无机盐，表面活性剂这类物质。

强烈建议在Phos-tag SDS-PAGE之前通过TCA沉淀或渗析法降低杂质含量。

转膜前处理：

另一个必须的步骤是在转膜前，用EDTA去除凝胶中的金属离子（Mn2+或者Zn2+）；

该步骤可提高蛋白的转膜效率。

●　分别准备10 mmol/L 含EDTA和不含EDTA 两种1x transfer buffer。

●　将凝胶浸泡在含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，至少20分钟，温和摇晃。更换新缓冲液，重复3次。

●　将凝胶浸泡在不含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，10分钟，温和摇晃。

●　转膜操作*。

* 建议用湿法转膜，以提高转膜效率。

blob.png

◆质量控制

每一批SuperSep Phos-tag?，出厂前均根据其产品规格进行测试，以保证可分离磷酸化和非磷酸化蛋白，以及他们的分离成都在正常参数内。

◆产品信息

用于Bio-Rad伯乐电泳仪

货号 品名 电泳仪 规格
198-17981 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well,

83×100×3.9mm

 Mini-PROTEAN?

Tetra Cell

(Bio-Rad Laboratories, Inc.)

 5 块
195-17991 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well,

83×100×3.9mm

 5 块

用于Life Technologies电泳仪

货号 品名 电泳仪 规格
192-18001 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well,

100×100×6.6mm

 XCell SureLock?

Mini-Cell

(Life Technologies, Inc.)

 

 5 块
199-18011 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well,

100×100×6.6mm

 5 块
产品编号 产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag?  (50 μmol/L), 10%, 13 well
Phos-tag 13孔10%预制胶		 5块
190-16721 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 10%, 17 well
Phos-tag 17孔10%预制胶		 5块
195-16391 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 13 well
Phos-tag 13孔12.5%预制胶		 5块
193-16571 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 17 well
Phos-tag 17孔12.5%预制胶		 5块
193-16691 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 15%, 13 well
Phos-tag 13孔15%预制胶		 5块
196-16701 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 15%, 17 well
Phos-tag 17孔15%预制胶		 5块
197-16851 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 17.5%, 13 well
Phos-tag 13孔17.5%预制胶		 5块
194-16861 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 17.5%, 17 well
Phos-tag 17孔17.5%预制胶		 5块
198-17981 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag? 预制胶，BioRad型		 5块
195-17991 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag? 预制胶，BioRad型		 5块
192-18001 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag? 预制胶，Life Technologies型		 5块
199-18011 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag? 预制胶，Life Technologies型		 5块

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

发表于由

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

英  文  名： Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution

产　　地： 日本

商　　家： Wako（和光纯药工业株式会社）

wao Phos-tag™实验设计

◆  研究领域

磷酸化蛋白和磷酸化多肽的研究

◆  Phos-tagTM 的简介

Phos-tagTM（Phosphate-binding tag）是由日本广岛大学的Kinoshita等研制的磷酸化蛋白蛋白捕获分子。Phos-tagTM 螯合Zn2+或者Mn2+等重金属离子后形成一个半封闭的空间。在pH值6~8的中性条件下，该空间恰好能容纳一个磷酸基团，使得螯合有金属离子的Phos-tagTM 分子能够与磷酸基团牢固而稳定的结合。可以特异性结合所有氨基酸的磷酸化基团，广泛运用于细菌，酵母，昆虫等物种研究。

◆  Phos-tagTM 系列产品

利用螯合有金属离子的Phos-tagTM 可以特异性结合磷酸化基团的特点，研发了Phos-tagTM 系列产品，运用于常见的蛋白实验，比如SDS-PAGE，免疫印迹，亲和层析，质谱等。

Phos-tagTM 系列产品 产品描述 用途 具体运用实验
Phos-tagTM   Acrylamide Phos-tagTM 与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合 分离磷酸化和非磷酸化蛋白。SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。 SDS-PAGE（单一蛋白）

免疫印迹（多种蛋白混合液，例如细胞裂解液，组织均浆液，体外激酶反应体系。使用目的蛋白的非磷酸化抗体作为一抗）
Phos-tagTM Biotin Phos-tagTM 与生物素（Biotin）结合 可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。 免疫印迹（正常SDS-PAGE）
Phos-tagTM  Agarose Phos-tagTM 与琼脂糖（Agarose）结合 利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合，纯化磷酸化蛋白。 亲和层析法
Phos-tagTM Mass Analytical kit Phos-tagTM 与不同荷质比的Zn结合 检测微量磷酸化蛋白和磷酸化多肽。 质谱实验

备注：除Phos-tagTM Mass Analytical kit之外，其他Phos-tagTM 系列产品都需要配置金属离子溶液。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法！
Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot检测（Phos-tag™ Biotin）、蛋白纯化 （Phos-tag™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag™ Mass Analytical Kit）。

◆Phos-tag™ 的基本结构

◆特点
与-2价磷酸根离子的亲和性和选择性高于其它阴离子
在pH 5-8的生理环境下生成稳定的复合物

◆原理

◆应用

样品类型: 纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液
样品来源物种: 无物种特异性，可用于人、植物（拟南芥 水稻 棉花等）、动物（斑马鱼 灵长类等）、微生物(酵母 细菌 真菌等） 昆虫（果蝇 蚕等）
分离蛋白大小: 磷酸化蛋白的分离范围在十几到220kDa，文献报道可分离350kDa的磷酸化蛋白
准备的试剂和仪器: 10mM的MnCl2溶液，固体产品需要溶解于甲醇中,其余与常规SDS-PAGE相同
各包装可做实验次数: 2mg包装20μM可制约20块胶，50μM约8块；10mg包装20μM可制100块胶，50μM约40块
凝胶染色: 考马斯亮蓝、银染、荧光染色、阴性染色

◆相关产品

产品名称 用　　途
　Phos-tag™ Acrylamide 　分离: SDS – PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白
　SuperSep Phos-tag™ 　分离: 预制胶中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide
　Phos-tag™ Biotin 　检测: 代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体
　Phos-tag™ Agarose 　纯化: 通用柱层析，纯化磷酸化蛋白
　Phos-tag™ Mass
Analytical Kit		 　分析: 用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析，提高磷酸化分子的检测灵敏度

 

Phos-tag Acrylamide（丙烯酰胺）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格 Phos-tag在配制胶中的浓度
20μM 50μM 100μM
304-93526 AAL-107S1 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3mL 约10块 约4块 约2块
300-93523 AAL-107M Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 2mg 约20块 约8块 约4块
304-93521 AAL-107 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 10mg 约100块 约40块 约20块

 

SuperSep Phos-tag™ （丙烯酰胺预制胶）

产品编号 产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well
Phos-tag 13孔10%预制胶		 5块
190-16721 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well
Phos-tag 17孔10%预制胶		 5块
195-16391 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well
Phos-tag 13孔12.5%预制胶		 5块
193-16571 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well
Phos-tag 17孔12.5%预制胶		 5块
193-16691 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well
Phos-tag 13孔15%预制胶		 5块
196-16701 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well
Phos-tag 17孔15%预制胶		 5块
197-16851 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well
Phos-tag 13孔17.5%预制胶		 5块
194-16861 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well
Phos-tag 17孔17.5%预制胶		 5块
198-17981 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶，BioRad型		 5块
195-17991 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶，BioRad型		 5块
192-18001 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型		 5块
199-18011 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型		 5块

Phos-tag™ Biotin（生物素）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
301-93531 BTL-104 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg
308-97201 BTL-111S1 Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml

Phos-tag™ Agarose（琼脂糖）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
302-93561 AG-501 Phos-tag™ Agarose 0.5ml
308-93563 AG-503 Phos-tag™ Agarose 3ml

Phos-tag™ Mass Analytical Kit（质谱分析试剂盒）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
305-93551 MS-101KIT Phos-tag™ Mass Analytical Kit 1 set

SuperSep Phos-tag™ 预制胶即开即用！
phos-tag™ 由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发。
SuperSep Phos-tag™ 是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phos-tag™ Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的结果条带也很整齐。

 板大小  100 x 100 x 3 (mm)
 凝胶大小  90 x 85 x 1 (mm)
 孔数  13  17
 孔容积  30 μL  25 μL
 Phos-tag™浓度  50 μmol/L
 丙烯酰胺浓度  10%、12.5%、15% 和17%
 ZnCl2浓度  100 μmol/L

 

◆优点、特色
·即开即用
·预制胶使用安全
·可长期保存（6个月）
·操作与普通SDS-PAGE一样

◆案例、应用
电泳条件：30 mA（恒电流）, 60分钟
样品：5 ug/Lane α-酪蛋白（含磷酸化与去磷酸化α-酪蛋白）（产品编号038-23221）
普通SDS-PAGE只观察到一条条带，而Phos-tag™ SDS-PAGE里可见α-酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化两条
条带。
样品缓冲液：Sample Buffer Solution (2ME+) (X4) (产品编号191-13272)
电泳缓冲液：SDS-PAGE 缓冲液, pH8.5(产品编号192-16801)
染色：QUICK CBB PLUS(产品编号174-00553)
P10%(左) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13well
P15%(中) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13well
A15%(右) : SuperSep™Ace, 15%, 13well （不含Phos-tag™）

◆相关产品

产品编号 产品名称 规　　格
 058-07681  EasySeparator <配套电泳槽>  1 套
 230-02461  Wide-View Prestained Protein Size Marker III (11~245kDa)  500 μL (200 次)
 038-23221  α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated  1 mg

◆具体实例

1. 体外激酶反应，激酶和底物都带有标签，反应后亲和层析法纯化获得激酶和底物，如何检测底物的磷酸化情况？

如果底物和激酶分子量差别大，通过正常的SDS-PAGE能够区分，建议使用Phos-tagTM Biotin。将激酶和底物进行免疫印迹实验，用Phos-tagTM Biotin作为抗体检测底物的磷酸化基团（需记录底物的条带位置）。可通过剥离（strip）方式剥离Phos-tagTM Biotin，用底物的非磷酸化抗体进一步验证其位置。

如果底物和激酶分子量差别不大，可进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验,然后转膜，用底物的非磷酸化抗体检测（没有使用激酶的抗体，所以检测不到激酶的带）。在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE中磷酸化和非磷酸化底物发生分离，用底物的非磷酸化抗体可以检测所有底物。免疫印迹实验后，观察所有的条带，非磷酸化底物由于没有和Mn2+-Phos-tagTM Acrylamide结合，所以迁移速度较快，磷酸化底物则迁移速度变慢。通过迁移率的变化，分析磷酸化底物的含量。

备注：

1） Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中，建议使用α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated（038-

       23221），该产品中含有磷酸化和非磷酸化的α-Casein，确保试剂和实验条件能够分离磷酸化蛋白。

2）如果没有非磷酸化底物，可使用Alkaline Phosphatase(for Biochemistry)（018-10693）对底物进行去磷酸

     化反应。

2. 如何检测EGF（表皮生长因子）刺激后细胞内MAPK的磷酸化水平？

收集EGF刺激的细胞，制备细胞裂解液作为样品。进行正常的SDS-PAGE实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验，转膜后用MAPK的非磷酸化抗体作为一抗进行检测（检测所有的MAPK，包括磷酸化和非磷酸化）。正常SDS-PAGE实验中，磷酸化的MAPK和非磷酸化MAPK没有分离，而在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中磷酸化MAPK和非磷酸胡MAPK发生分离，所以转膜后，用MAPK抗体检测，可以看到分离的条带。比较正常的SDS-PAGE用MAPK抗体的免疫印迹实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE用MAOK抗体的免疫印迹实验，多出来的条带就是磷酸化的MAPK。

备注：该实验的前提是EGF刺激后细胞内的MAPK发生磷酸化，细胞内包含磷酸化和非磷酸化的MAPK。如果刺激后细

          胞内不含有磷酸化的MAPK，则无法用Phos-tagTM Acrylamide分离磷酸化和非磷酸化MAPK。

3. 研究蛋白相互作用的实验中，构建带有不同标签的2种融合蛋白，共转染细胞，在细胞内发生磷酸化反应。通过不同标

    签的亲和层析柱获得纯化的蛋白，是否可用Phos-tagTM Agarose纯化，进行后续免疫共沉淀实验（Co-IP）实验？

Phos-tagTM Agarose纯化磷酸化蛋白，采用高盐的洗脱方式，没有使用界面活性剂、还原剂、酸或者碱洗脱，蛋白不发生变性，可进行后续的Co-IP实验。

4. 检测的样品中含有两种磷酸化的蛋白，分子量很接近，如何使用Phos-tagTM 产品检测磷酸化？

如果样品中两种磷酸化蛋白的分子量很接近，通过正常的SDS-PAGE实验无法区分，建议使用Phos-tagTMAcrylamide。进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验后用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测。

也可以使用Phos-tagTM Biotin。进行正常SDS-PAGE实验后，先用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测，剥离（strip）后用Phos-tagTM Biotin。如果磷酸化蛋白量少的　话，剥离（strip）会去除一些蛋白，可能会影响检测的效果。

5. 使用Phos-tagTM Mass Analytical kit，样品中如果含有磷酸缓冲液是否有影响？

该试剂盒检测磷酸化蛋白和多肽的灵敏度较高，样品中含有的磷酸缓冲液会影响磷酸化蛋白与Phos-tagTM 结合。

Phos-tag(TM) Acrylamide Phos-tag丙烯酰胺

发表于由

Phos-tag(TM) Acrylamide Phos-tag丙烯酰胺

货号：300-93523; 304-93521; 304-93526
包装：2mg;10mg;0.3ml

英文名：Phos-tag Acrylamide

品牌：Wako

使用Phos-tag(TM) SDS-PAGE和Phos-tag Acrylamide分离磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白。

Phos-tag™ 丙烯酰胺 Phos-tag™ Acrylamide
使用Phos-tag™ 进行磷酸化蛋白质的迁移率测定
– 使用丙烯酰胺标记的Phos-tag™ 进行磷酸蛋白亲和电泳层析
Phos-tag™ Acrylamide AAL-107
Phos-tag<sup>™</sup> Acrylamide
Phos-tag™是由广岛大学高分子科学系开发的一种中性pH环境(生理pH)下的新型磷酸结合标记。Phos-tag™ SDS-PAGE这种电泳方法可以同时分析磷酸化蛋白异构体和配对二价锰的非磷酸化蛋白，是一种使用Pho-tag™琼脂糖用于分离，纯化和富集磷酸化蛋白质的全新方法。该方法只需在常规的SDS-PAGE胶中添加Phos-tag™Acrylamide （Phos-tag™ 丙烯酰胺）和锌离子或者锰离子即可实验。
Phos-tag™磷酸化亲和电泳原理
Phos-tag<sup>™</sup>磷酸化亲和电泳原理
 Phos-tag  丙烯酰胺
Phos-tagTM SDS-PAGE 特点：
■ 不含放射性元素，非荧光物质
■ 不同位点磷酸化修饰的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来
■ 操作过程与常规 SDS-PAGE相类似
■ Phos-tag ™ 的结合特异性与氨基酸种类、序列无关
■ Phos-tag ™ SDS-PAGE实验后，可进行常规的免疫印迹或者质谱实验，也可进行 2 维电泳
■ 可区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白
■ Phos-tag ™ 母液可稳定保存至少 3 个月
Phos-tag ™应用
Phos-tag Acrylamide - 上海金畔生物,专业的Phos-tag产品供应商
Phos-tag™ 丙烯酰胺 Phos-tag™ Acrylamide 相关产品
货号
厂商编号
产品名称
规格
304-93526
AAL-107S1
Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution
Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107 5mM水溶液
0.3 ml （约0.9 mg）
300-93523
AAL-107M
Phos-tag™ Acrylamide AAL-107
Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107
2 mg
304-93521
AAL-107
10 mg
Phos-tag™ Acrylamide在配胶中的使用浓度
货号
产品名称
使用浓度
20uM
50uM
100uM
304-93526
Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution
Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107 5mM水溶液
约10块
约4块
约2块
300-93523
Phos-tag™ Acrylamide AAL-107
Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107
约20块
约8块
约4块
304-93521
约100块
约40块
约20块

wako Phos-tag™ Acrylamide丙烯酰胺

Phos-tag™ Acrylamide

SDS-PAGE分离不同磷酸化水平的蛋白！

在不使用放射性同位素的情况下，利用Phos-tag™ SDS-PAGE即可分离不同条带中的磷酸化和非磷酸化蛋白。分离后的凝胶可用于Western blotting和质谱分析等后续实验。

Phos-tag™ SDS-PAGE操作简单，只需在常规SDS-PAGE胶中加入Phos-tag™ Acrylamide 和Mn2+或者Zn2+即可进行实验。在电泳过程中，磷酸化蛋白的磷酸基团与Phos-tag™中的二价金属离子相结合，降低其迁移速度，从而可区分磷酸化与非磷酸化蛋白。

上海金畔生物科技有限公司

服务热线:18301939375   QQ：3258089810    3259632176

Email:  info@jinpanbio.com

◆原理

◆优点、特色

  • 采用Phos-tag™ SDS-PAGE可轻松分离磷酸化蛋白

无任何放射性元素及化学标记！

  • 可检测不同磷酸化水平的磷酸化蛋白

无需任何磷酸化抗体！

  • 适用于内源性蛋白的磷酸化分析！

◆案例、应用

【使用Phos-tag™ SDS-PAGE的磷酸化/非磷酸化蛋白比较】

我推荐使用Phos-tag ™ ——东京大学研究院医学研究科 小川觉之

Phos-tag ™ 是专为研究磷酸化蛋白而新开发出来的试剂。此产品使用方便，不但可用于体外实验，还能定量分析体内蛋白的磷酸化水平。Phos-tag ™ SDS-PAGE 可用于常规电泳实验，无需购买特殊设备，性价比高。传统蛋白磷酸化的研究需要特异的磷酸化抗体、RI 等其它试剂，操作复杂，花费大，且放射性元素会有安全隐患，而Phos-tag ™ 的出现恰恰可以弥补这些缺点，为磷酸化蛋白研究提供新的方向。

磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白利用Phos-tag ™ SDS-PAGE 的分离效果图

Lane 1 为非磷酸化蛋白，Lane 2-5 为磷酸化蛋白，各蛋白因磷酸化状态不同而条带迁移率也有所不同。

磷酸化/ 非磷酸化蛋白的数量比、磷酸化程度、磷酸化蛋白的丰度等都可根据条带迁移和条带浓度求得。

【资料提供】

日本东京大学研究生院医学系研究科

【二维电泳中的应用：分析hnRNP K 磷酸化异构体】

小鼠巨噬细胞J774.1 经LPS 刺激后，裂解细胞，经过免疫沉淀法分离得到hnRNP K。在二维电泳中，一维是IPG 胶，二维是Phos-tag ™ SDS-PAGE，可分离hnRNP K 的异构体。利用质谱仪，可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。

二维电泳

同一个等电点的位置上，不同位点发生磷酸化都可以被区分开来（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）

【参考文献】

Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics , Nov 2010; 10(21): 3884-95.

【结果提供】

横滨市立大学 生命纳米系统科学研究科 生物体超分子系统科学专业 木村弥生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）理化学研究所RCAI 小原收

【EGF 刺激前后MAPK 磷酸化水平的变化】

常规SDS-PAGE 和Phos-tagTM SDS-PAGE 后迚行克疫印迹实验分析EGF 刺激的A431 细胞中MAPK 磷酸化水平。

摘自Kinoshita-Kikuta, E. et al., Mol.Cell. Proteomics. (2007)6: 356.

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
304-93526  Phos-tag Acrylamide AAL-107
5mM Aqueous Solution Phos-tag 丙烯酰胺5mM水溶液		 0.3mL 蛋白研究 –
300-93523  Phos-tag Acrylamide AAL-107
Phos-tag 丙烯酰胺		 2mg 蛋白研究 –
304-93521  Phos-tag Acrylamide AAL-107
Phos-tag 丙烯酰胺		 10mg 蛋白研究 –
134-15302 Manganese(II) Chloride Tetrahydrate氯化锰四水合物 25g for Molecular Biology –

 

wako磷酸化蛋白电泳试剂- Phos-tag (TM) Acrylamide

发表于由

磷酸化蛋白电泳试剂——wako Phos-tag (TM) Acrylamide

什么是Phos-tag™

Phos-tag ™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子，结合特异性与氨基酸的种类和序列无关，无放射性，无需特意制备磷酸化抗体。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot 检测（Phos-tag ™ Biotin）、蛋白纯化 （Phos-tag ™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag ™ Mass Analytical Kit） 。

Phos-tag的基本结构：

 

 

 

 

 

 

1. Phos-tag™ Acrylamide

Phos-tag™ Acrylamide SDS-PAGE可根据迁移率不同，区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。该方法只需在常规的SDS-PAGE胶中添加Phos-tag™ Acrylamide和MnCl2即可进行实验（制胶过程中添加，如需详细说明请联系我们）。

特点
# 非放射性元素，非荧光物质
# 磷酸化蛋白亚型可以在同一电泳道分离出多条带
# 操作简便，与常规SDS-PAGE蛋白电泳相似
# Phos-tag™ 的结合特异性与氨基酸种类、序列无关
# Phos-tag™ SDS-PAGE实验后，可进行常规的免疫组化、质谱等
# 性质稳定，溶于蒸馏水后可以稳定保存至少3个月
# 磷酸化和非磷酸化蛋白可以同时被分离检测
# 不同位点磷酸化修饰以及磷酸化程度不同的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来

原理

应用

1、黄色粘性油状物质；

2、在4度可保存至少一年；

3、Phos-tagTM与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合分离磷酸化和非磷酸化蛋白。

SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。

在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。

Phos-tag® Acrylamide可根据迁移率不同，区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。无放射性、非化学物质标记。不同位点磷酸化修饰的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来。

操作过程与普通SDS-PAGE相类似。Phos-tagTM的特异性结合与氨基酸种类、序列无关。

适用于免疫印迹、质谱分析等后续工作。可识别磷酸化和非磷酸化蛋白。

Phos-tagTM母液可稳定保存至少3个月。

可检测出具有不同磷酸基团数目的蛋白。无需特意制备磷酸化抗体。

产品编号 产品名称 规格 原价
304-93526 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3ml 2670
300-93523 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 2mg 4450
304-93521 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 10mg 10680

Phos-tag Acrylamide (AAL-107)     Wako Cat. #304-93521 (10 mg)]⇒ Protocol(点击进入下载)


Phos-tag Acrylamide (AAL-107)   Wako Cat. #300-93523 (2 mg)]⇒ Protocol(点击进入下载)

 

 

References  参考文献：

    1. “Recognition of phosphate monoester dianion by an alkoxide-bridged dinuclear zinc (II) complex”, E. Kinoshita, M. Takahashi, H. Takeda, M. Shiro, and T. Koike, Dalton Trans., 21, 1189-1193 (2004).

 

    1. “Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, K. Takiyama, and T. Koike, Mol. Cell.
      Proteomics      , 5, 749-757 (2006).

 

    1. “A single nucleotide polymorphism genotyping method using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Anal. Biochem., 361, 294-298 (2007).

 

    1. “Label-free kinase profiling using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, Y. Aoki, E. Kinoshita, and T. Koike, Mol. Cell. Proteomics, 6, 356-366 (2007).

 

    1. “Separation of a phosphorylated-His protein using phosphate-affinity Polyacrylamide gel”, S. Yamada, H. Nalkamura, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and Y. Shiro, Anal. Biochem., 360, 160-162 (2007).

 

    1. “A mobility-shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike, Anal. Biochem., 378, 102-104 (2008).

 

    1. “Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate-affinity SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, S. Yamada, H. Nakamura, Y. Shiro, Y. Aoki, K. Okita, and T. Koike, Proteomics, 8, 2994-3003 (2008).

 

    1. “FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to turn on the Fanconi anemia pathway”, M. Ishiai, H. Kitao, A. Smogorzewska, J. Tomida, A. Kinomura, E. Uchida, A. Saberi, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, S. Tashiro, S. J. Elledge, and M. Takata, Nature Struct. Mol. Biol., 15, 1138-1146 (2008).

 

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    1. “Phosphate-affinity Gel Electrophoresis Using a Phos-tag Molecule for Phosphoproteome Study”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Current Proteomics, 6, 104-121 (2009).

 

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wako 125-05061赖氨酰肽链内切酶

发表于由

wako 125-05061赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase 
【产品详情】
赖氨酰肽链内切酶
品牌：WAKO 和光
级别：质谱级
赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase 125-05061 wako
英文品名：Lysyl Endopeptidase?, Mass Spectrometry Grade
货号：125-05061
规格：5×20 μg
应用：蛋白质组学。
用途：赖氨酰肽链内切酶，蛋白测序、质谱分析，多肽合成
赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase 125-05061 wako
【实验原理】
赖氨酰肽链内切酶是质谱分析前处理时最常用的蛋白分解酶即赖氨酰肽链内切酶，赖氨酰肽链内切酶可以特异性切除赖氨酸基团C 末端的多肽，赖氨酰肽链内切酶可用于蛋白测序分析和Lys-X 化合物的酶合成。
若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶，可更好地切断赖氨酸基团的多肽，增加多肽的数量。赖氨酰肽链内切酶已按照使用习惯做成小包装，是方便使用赖氨酰肽链内切酶的冷冻干燥品。
【产品特点】
赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase 125-05061 wako
1）赖氨酰肽链内切酶用于蛋白质谱分析：高特异性、高蛋白质消化率；
2）赖氨酰肽链内切酶能增加肽段数量、提高裂解效率；
3）赖氨酰肽链内切酶独立包装，20 μg/一支
【结果】表明Lep 酶解的错误裂解率最低。
Tp 酶解时加入Lep 后，错误裂解率有所降低，同时，赖氨酰肽链内切酶可以鉴定出更多的多肽。

Tp Lep Lep +Tp
裂解位点 精氨酸和赖氨酸的C 端 赖氨酸的C端 精氨酸和赖氨酸的C端
错误裂解率( 错误裂解所占比例) 多(8 %) 很少(0 %) 少(3 %)
鉴定出的多肽数量 17 19 22

赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase 125-05061 wako
Lep+Tp 赖氨酰肽链内切酶切后，可以在m/z=2000 时得到吸收峰，而单独的Tp 酶切在m/z=2000 时没有吸收峰。该结果表明Lep 可以提高测序覆盖度。
赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase 125-05061 wako

 

WAKO 其他产品清单：

 

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

货号   品名     规格  Cas

012-01965   Alminium Oxide   500g     –

012-08643   Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B 1mL×5A –

013-08391   Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H 5mL      –

015-14461   Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2  5mL      –

015-25191   Anti Phosphorylated α-Synuclein, Monoclonal Antibody (pSyn#64)      50ul      –

011-14463   Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2  1mL×5A –

011-19365   2,2′-Azobis[2-(2-imidazolin-2-yl)propane]

Dihydrochloride   500g     27776-21-2

016-08641   Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B 5mL      –

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

016-20001   Anti Iba1, Rabbit (for Western Blotting)     50μg     –

016-23281   Anti Rat P2X4, Monoclonal Antibody     50ug     –

017-19362   2,2′-Azobis[2-(2-imidazolin-2-yl)propane] Dihydrochloride    25g 27776-21-2

018-08721   Agar, Powder     100g     9002-18-0

018-22021   Anti Mouse Ago2, Monoclonal Antibody 100μL    –

019-03435   Ammonium sulfate    500g     7783-20-2

019-19741   Anti Iba1, Rabbit (for Immunocytochemistry)    50μg     –

019-22291   Anti Olfactory Marker Protein, Goat      100μL    –

021-02195   Boric acid     500g     10043-35-3

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

021-16201   BES-H2O2(Cell-impermeant)   1mg      –

031-17601   Collagenase Type I    100mg   9001-12-1

032-08385   Citric Acid Monohydrate   500g     5949-29-1

032-15372   Casein Phosphopeptide    25g –

034-06363   N-Caprylic Acid   25mL    124-07-2

034-16111   Cefotaxime Sodium Salt   1g   64485-93-4

035-04595   Creatinine    500g     60-27-5

035-17604   Collagenase Type I    1g   9001-12-1

038-23221   α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated  1mg      –

039-01335   Carboxymethyl Cellulose Sodium Salt   500g     9004-32-4

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

021-17801   BES-So-AM 1mg      936356-51-3

022-07985   γ-Butyrolactone  500mL   96-48-0

025-03195   Buffer Solution Standard (Phosphate pH Standard Equimolal Solution)

pH6.86 (25 degrees C)    500mL   –

047-18863   Dexamethasone 100mg   50-02-2

049-18801   4′,6-Diamidino-2-phenylindole Dihydrochloride n-Hydrate      10mg      28718-90-3

058-07681   EasySeparator    1set      –

025-03195   Buffer Solution Standard (Phosphate pH Standard Equimolal Solution)

pH6.86 (25 degrees C)    500mL   –

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

019-08393   Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H 5Ax1mL –

019-11941   Active Carbon-impregnated Silica Gel   10g –

019-19741   Anti Iba1, Rabbit (for Immunocytochemistry)    50μg     –

025-15481   BES-Thio     1mg      –

026-16371   BF-170  1mg      –

027-01276   Benzyl Alcohol    500mL   100-51-6

028-03185   Buffer Solution Standard (Phthalate pH Standard Solution)

pH4.01 (25 degrees C)    500mL   –

028-03185   Buffer Solution Standard (Phthalate pH Standard Solution)

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

pH4.01 (25 degrees C)    500mL   –

028-03205   Buffer Solution Standard (Tetraborate pH Standard Solution)

pH9.18 (25 degrees C)    500mL   –

077-03155   Gelatin   500g     9000-70-8

081-00136   Heparin Sodium  10mu    9041-08-1

088-00705   L-Histidine Hydrochloride Monohydrate      500g     5934-29-2

093-06471   Insulin, Human, recombinant   50mg    –

097-06474   Insulin, Human, recombinant   1g   11061-68-0

120-04891   L-012    100mg   –

125-05061   Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade      5×20μg  –

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

129-02541   Lysyl Endopeptidase( R)   10AU     –     –

129-04861   LY 294002   5mg      154447-36-6

130-07871   Melibiose     5g   585-99-9

028-16211   BES-So (Cell-impermeant)      1mg      –

028-17811   BES-H2O2-Ac     1mg      –

029-16361   BF-168  1mg      –

039-23511   CultureSure? Freezing Medium    100ml    –

041-18861   Dexamethasine   1g   50-02-2

042-29445   Dibasic Sodium Phosphate Hydrate 500g     10039-32-4

043-22611   Dextran 200,000 100g     9004-54-0

064-05381   Fibroblast Growth Factor (basic)(FGFb / bFGF / FGF2),

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

Human, recombinant, Animal-derived-free  50ug     106096-93-9

071-02293   gamma-Globulin, from Human Serum   5g   9007-83-4

075-03075   Gellan Gum  500g     71010-52-1

131-00405   Magnesium Sulfate    500g     10034-, 99-8

136-03032   Methyl Red   25g 493-52-7

137-06085   Molecular Sieves 4A1/16  500g     70955-01-0

138-07872   Melibiose     25g 585-99-9

145-08221   Nuclease P1 500u     54576-84-0

145-08221   Nuclease P1 500u     54576-84-0

162-09115   Polyethylene Glycol 4,000 500g     25322-68-3

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

163-03545   Potassium Chloride    500g     7447-40-7

164-21655   N/400 Potassium Polyvinyl Sulfate Solu 500mL   26837-42-3

191-01785   Trisodium Citrate Dihydrate    500g     6132-04-3

193-02041   Glycerol 2-Phosphate Disodium Salt n-Hydrate   100g     819-83-0

195-12854   Streptavidin, from Streptomyces avidinii     5mg      9013-20-1

195-16031   StemSure (R) Freezing Medium     100ml    –

196-00015   Sucrose 500g     57-50-1

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

196-08675   Sodium Dodecyl Sulfate    500g     151-21-3

197-07485   Sodium Sulfate   500g     7757-82-6

199-02825   Sodium Dihydrogenphosphate Dihydrate    500g     13472-35-0

203-17561   Trichostatin A     1mg      58880-19-6

207-00055   L(+)-Tartaric Acid     500g     87-69-4

208-08385   1mol/l Triethylammonium Hydrogencarbonate Solution   500mL   15715-58-9

223-02112   VA-044  25g 27776-21-2

225-02111   VA-044  100g     27776-21-2

165-09105   Polyethylene Glycol 2,000 500g     25322-68-3

165-17035   Polyvinylpyrrolidone K 30 500g     9003-39-8

167-09045   Polyethylene Glycol 200   500g     25322-68-3

169-09125   Polyethylene Glycol 6,000 500g     25322-68-3

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

185-01003   Rifampicin    5g   13292-46-1

186-01114   all-trans-Retinoic Acid 50mg    302-79-4

189-01001   Rifampicin    1g   13292-46-1

190-05535   Trisodium Citrate Dihydrate    500g     6132-04-3

191-01665   Sodium Chloride  500g     7647-14-5

227-01071   Valproic Acid 5g   99-66-1

231-02011   Wetting Tension Test Mixture No.52.0  50mL    –

232-01941   Wetting Tension Test Mixture No.42.0  50mL    –

233-01971   Wetting Tension Test Mixture No.45.0  50mL    –

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

234-02001   Wetting Tension Test Mixture No.50.0  50mL    –

235-01931   Wetting Tension Test Mixture No.41.0  50mL    –

235-02031   Wetting Tension Test Mixture No.56.0  50mL    –

236-01961   Wetting Tension Test Mixture No.44.0  50mL    –

238-01921   Wetting Tension Test Mixture No.40.0  50mL    –

238-02021   Wetting Tension Test Mixture No.54.0  50mL    –

238-02141   Wetting Tension Test Mixture No.73.0  50mL    7732-18-5

253-00513   Y-27632 5mg      331752-47-7

257-00511   Y-27632 1mg      331752-47-7

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

290-34251   Presep-C DNPH   20EA     –

296-63801   LabAssay? Phospholipid   1300tests     –

298-64101   Fructooligosaccharides standard set     set  –

302-93561   Phos-tag (TM) Agarose    0.5mL    –

304-93521   Phos-tag (TM) Acrylamide AAL-107      10mg    –

304-93521   Phos-tag (TM) Acrylamide AAL-107      10mg    –

290-34251   Presep-C DNPH   20EA     –

290-63701   LabAssay? Triglyceride    1000tests     -2016-2-29

290-65901   LabAssay? Creatinine      500tests –

291-58601   Lab Assay ALP    900tests –

293-51601   Endotoxin Extracting Solution for LAL Test  10mL x 4     –

294-62001   DsDD cDNA Subtraction kit Wako   5tests    –

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

294-63601   LabAssay? NEFA 750tests –

294-65801   LabAssay? Cholesterol    1000tests     –

295-50201   DNA Extractor? Kit   50tests  –

295-51301   Limulus ES-II Single Test Wako     25 tests –

295-51301   Limulus ES-II Single Test Wako     25 tests –

295-73401   Fructooligosaccharides Set      Set  –

304-93526   Phos-tag (TM) Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution   0.3ml    –

305-93551   Phos-tag? Mass Analytical Kit set  –

308-93541   Phos-tag (TM) Biotin BTL-105 10mg    –

308-93563   Phos-tag (TM) Agarose    3mL      –

308-97201   Phos-tag Biotin BTL-1111 1mM Aqueous Solution    0.1000mL    –

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

325-88521   Lipase PS Amano SD  10g –

298-65701   LabAssay? Glucose   1000tests     –

300-93523   Phos-tag (TM) Acrylamide AAL-107      2mg      –

301-93531   Phos-tag (TM) Biotin BTL-104 10mg    –

301-99413   Phos-tagTM Biotin BTL-104 1mM Aqueous Solution[for Campaign]     0.1mL      753451-66-0

302-93522   Phos-tagTM Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution[for Campaign]      0.3mL    871839-54-2

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

631-00651   Cellmatrix Type I -A (Collagen, Type I, 3 mg/mL, pH 3.0)     20mL    –

637-00653   Cellmatrix Type I -A (Collagen, Type I, 3 mg/mL, pH 3.0)     100mL   –

637-00653   Cellmatrix Type I -A (Collagen, Type I, 3 mg/mL, pH 3.0)     100mL   –

638-01021   Endotoxin Standad /JPSE  10000un      –

986-10001   Anti asialo GM1 (Rabbit), (014-09801)  1mL      617-45-8

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货