wako 用于磷酸化蛋白的WB检测– Phos-tag™ Biotin

发表于2016年3月3日由jinpanbio

wako Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag，用于磷酸化蛋白的WB检测

Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™，可代替western blot检测中的磷酸化抗体。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白。现推出液体型。

特点：

无辐射
无需PVDF膜的封闭处理
Phos-tag™的特异性结合与氨基酸种类、序列无关
可适用于免疫印迹和质谱分析等后续工作
Phos-tag™-BTL母液可稳定保存至少6个月
实验流程与使用HRP标记抗体相类似
可用于所有的磷酸化蛋白检测
与普通WB检测相似。但无需使用磷酸化抗体

【Phos-tag™ Biotin免疫印迹原理】

应用实例：

应用实例：使用Phos-tag™BTL-104进行斑点印迹检测
非磷酸化蛋白：Bovine Serum Albumin, Human Serum Albumin, Carbonic Anhydrase, β- Galactosidase
磷酸化蛋白：α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
去磷酸化蛋白： (用碱性磷酸酶处理) α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin

Application (3): Western Blotting:
Phos-tag Biotin BTL-104 [Wako Cat. #301-93531 (10 mg)]⇒ Protocol（点击进入）

Phos-tag Biotin BTL-105 [Wako Cat. #304-93541 (10 mg)]⇒ Protocol（点击进入）

产品描述

1、粉末；

2、在4度可保存至少一年；

3、检测磷酸化蛋白；

4、Phos-tagTM与生物素（Biotin）结合可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。

可用于免疫印迹实验，二维电泳。

产品编号	产品名称	规格	原价
305-99411	Phos-tag™ Biotin BTL-104 1mM Aqueous	0.3ml	2700
308-97201	Phos-tag™ Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution	0.1ml	3560
301-93531	Phos-tag™ Biotin BTL-104	10mg	12460
308-93541	Phos-tag™ Biotin BTL-105	10mg	12460

BTL-104、BTL-105、BTL-111三者连接链（Linher)长度不一，但使用上基本相同.BTL-111灵敏度最高，推荐使用溶解性比较高的BTL-104。

wako Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag使用的先关问题解答

wako 193-16711-SuperSep Phos-tag™ 预制胶

发表于2016年3月3日由jinpanbio

wako 193-16711-SuperSep Phos-tag™ 预制胶（蛋白磷酸化研究）

蛋白磷酸化研究的预制胶

新品速递图wako.jpg

SuperSep Phos-tag

SuperSep Phos-tag是研究蛋白磷酸化的方法，无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记。

◆SuperSep Phos-tag

Phos-tag?是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phostag? Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中心凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的带条结果也很整齐。

磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白作为不同条带分离。

分离后，胶可用于考马斯亮蓝染色，免疫印迹和质谱实验。

◆Phos-tag SDS-PAGE 的原理

◆在HighWire Search 上搜索到的论文数

◆运用

利用p35的丙氨酸突变体确定Cdk5 激活p35的磷酸化位点

p35常见的磷酸化位点是Ser8和Thr138。但是Ser8和Thr138位点往往会发生丙氨酸突变，产生3种突变体（Ser8突变体：S8A，Thr138突变体：T138A，Ser8和Thr138双突变体：2A）。这3种突变体、野生型p35、Cdk5和没有激酶活性的Cdk5都来源于COS-7细胞。这些细胞裂解液用Phos-tag? SDS-PAGE和Western blotting 进行检测（检测抗体：p35抗体）。

100 μM Phos-tag ? 丙烯酰胺, 7.5% 聚丙烯酰胺凝胶

可明确磷酸化位点和条带迁移率的关系！

– 泳道1（条带L2和L4）和泳道5（条带M1）：p35在Cdk5的作用下发生了磷酸化；

– 泳道1（条带L2和L4）和泳道3（条带L2和L4）：在无激酶活性Cdk5的作用下，大约有一半p35蛋白在Thr138位点

发生磷酸化，同样在138位发生突变的p35蛋白亦是如此。

– 泳道5 （条带M1）和泳道6（条带L3和L4）：Ser8和Thr138是主要的磷酸化位点；

– 泳道5（条带M1）、泳道7（条带L1和L2）和泳道8（条带M2）：条带M1是Ser8和Thr138都发生磷酸化的条带；

条带M2是只有Ser8磷酸化的条带；条带L1和L2是只有Thr138磷酸化的条带。

※ 条带L1和L3中的X 是不确定哪个位点发生磷酸化的条带；

※ 条带L4是非磷酸化的p35。

【参考文献】

Quantitative Measurement of in Vivo Phosphorylation States of Cdk5 Activator p35 by Phos-tag ? SDS-PAGE. T. Hosokawa, T. Saito, A. Asada, K. Fukunaga, and S. Hisanaga,Mol. Cell. Proteomics, Jun 2010;9: 1133 – 1143.

【结果提供】

理化学研究所脑科学综合研究中心回路功能研究核心记忆功能研究团队细川智永（Dr. T. Hosokawa）

首都大学东京理工学研究科生命科学专业神经分子功能研究室久永真市（Dr. S. Hisanaga）

检测含有Dnmt1磷酸化激酶的片段

我们可以确定在片段中含有目的激酶！

① 采用亲和色谱法从鼠脑提取液中纯化GST-Dnmt1（1-290）结合蛋白

② 使用0.3 M 和1 M NaCl 的DNA 纤维素柱洗脱得到目的蛋白

③ GST-Dnmt1（1-290）作为体外激酶实验的反应底物

④ Phos-tag SDS-PAGE 用于Western blotting，确定迁移条带中每个片段的激酶活性

【参考文献】

The DNA-binding activity of mouse DNA methyltransferase 1 is regulated by phosphorylation with casein kinase 1delta/epsilon. Y. Sugiyama, N. Hatano, N. Sueyoshi, I. Suetake, S. Tajima, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and I. Kameshita, Biochem. J.,

【结果提供】

高知大学综合研究中心生命、功能物质部门实验实习机器设施杉山康宪（Dr. Y. Sugiyama）

香川大学农学部应用生物科学科动物功能生化学研究室龟下勇（Dr. I. Kameshita）

二维电泳中的应用：分析hnRNP K磷酸化异构体

小鼠巨噬细胞J774.1 经LPS 刺激后，裂解细胞，经过免疫沉淀法分离得到hnRNP K。在二维电泳中，一维是IPG 胶，二维是Phos-tag ? SDS-PAGE，可分离hnRNP K 的异构体。利用质谱仪，可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。

同一个等电点的位置上，不同位点发生磷酸化都可以被区分开来

（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）

【参考文献】

? Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics, Nov 2010; 10(21): 3884-95.

【结果提供】

横滨市立大学生命纳米系统科学研究科生物体超分子系统科学专业木村弥生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）

理化学研究所RCAI 小原收

◆备注

样品制备：

Phos-tag SDS-PAGE对于蛋白样品中的杂质非常敏感，尤其是螯合剂，钒酸，无机盐，表面活性剂这类物质。

强烈建议在Phos-tag SDS-PAGE之前通过TCA沉淀或渗析法降低杂质含量。

转膜前处理：

另一个必须的步骤是在转膜前，用EDTA去除凝胶中的金属离子（Mn2+或者Zn2+）；

该步骤可提高蛋白的转膜效率。

●　分别准备10 mmol/L 含EDTA和不含EDTA 两种1x transfer buffer。

●　将凝胶浸泡在含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，至少20分钟，温和摇晃。更换新缓冲液，重复3次。

●　将凝胶浸泡在不含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，10分钟，温和摇晃。

●　转膜操作*。

* 建议用湿法转膜，以提高转膜效率。

◆质量控制

每一批SuperSep Phos-tag?，出厂前均根据其产品规格进行测试，以保证可分离磷酸化和非磷酸化蛋白，以及他们的分离成都在正常参数内。

◆产品信息

用于Bio-Rad伯乐电泳仪

货号

品名

电泳仪

规格

198-17981

SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well,

83×100×3.9mm

Mini-PROTEAN?

Tetra Cell

(Bio-Rad Laboratories, Inc.)

5 块

195-17991

SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well,

83×100×3.9mm

5 块

用于Life Technologies电泳仪

货号

品名

电泳仪

规格

192-18001

SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well,

100×100×6.6mm

XCell SureLock?

Mini-Cell

(Life Technologies, Inc.)

5 块

199-18011

SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well,

100×100×6.6mm

5 块

产品编号	产品名称	产品规格
193-16711	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 10%, 13 well Phos-tag 13孔10%预制胶	5块
190-16721	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 10%, 17 well Phos-tag 17孔10%预制胶	5块
195-16391	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 13 well Phos-tag 13孔12.5%预制胶	5块
193-16571	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 17 well Phos-tag 17孔12.5%预制胶	5块
193-16691	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 15%, 13 well Phos-tag 13孔15%预制胶	5块
196-16701	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 15%, 17 well Phos-tag 17孔15%预制胶	5块
197-16851	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 17.5%, 13 well Phos-tag 13孔17.5%预制胶	5块
194-16861	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 17.5%, 17 well Phos-tag 17孔17.5%预制胶	5块
198-17981	SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm Phos-tag? 预制胶，BioRad型	5块
195-17991	SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm Phos-tag? 预制胶，BioRad型	5块
192-18001	SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm Phos-tag? 预制胶，Life Technologies型	5块
199-18011	SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm Phos-tag? 预制胶，Life Technologies型	5块

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

发表于2016年3月3日由jinpanbio

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

英文名： Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution

产　　地：日本

商　　家： Wako（和光纯药工业株式会社）

wao Phos-tag™实验设计

◆ 研究领域

磷酸化蛋白和磷酸化多肽的研究

◆ Phos-tag^TM的简介

Phos-tag^TM（Phosphate-binding tag）是由日本广岛大学的Kinoshita等研制的磷酸化蛋白蛋白捕获分子。Phos-tag^TM 螯合Zn2+或者Mn2+等重金属离子后形成一个半封闭的空间。在pH值6~8的中性条件下，该空间恰好能容纳一个磷酸基团，使得螯合有金属离子的Phos-tag^TM分子能够与磷酸基团牢固而稳定的结合。可以特异性结合所有氨基酸的磷酸化基团，广泛运用于细菌，酵母，昆虫等物种研究。

◆ Phos-tag^TM 系列产品

利用螯合有金属离子的Phos-tag^TM 可以特异性结合磷酸化基团的特点，研发了Phos-tag^TM 系列产品，运用于常见的蛋白实验，比如SDS-PAGE，免疫印迹，亲和层析，质谱等。

Phos-tagTM 系列产品	产品描述	用途	具体运用实验
Phos-tagTM Acrylamide	Phos-tagTM 与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合	分离磷酸化和非磷酸化蛋白。SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。	SDS-PAGE（单一蛋白）免疫印迹（多种蛋白混合液，例如细胞裂解液，组织均浆液，体外激酶反应体系。使用目的蛋白的非磷酸化抗体作为一抗）
Phos-tagTM Biotin	Phos-tagTM 与生物素（Biotin）结合	可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。	免疫印迹（正常SDS-PAGE）
Phos-tagTM Agarose	Phos-tagTM 与琼脂糖（Agarose）结合	利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合，纯化磷酸化蛋白。	亲和层析法
Phos-tagTM Mass Analytical kit	Phos-tagTM 与不同荷质比的Zn结合	检测微量磷酸化蛋白和磷酸化多肽。	质谱实验

备注：除Phos-tag^TM Mass Analytical kit之外，其他Phos-tag^TM 系列产品都需要配置金属离子溶液。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法！
Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot检测（Phos-tag™ Biotin）、蛋白纯化（Phos-tag™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag™ Mass Analytical Kit）。

◆Phos-tag™ 的基本结构

◆特点
与-2价磷酸根离子的亲和性和选择性高于其它阴离子
在pH 5-8的生理环境下生成稳定的复合物

◆原理

◆应用

样品类型: 纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液
样品来源物种: 无物种特异性，可用于人、植物（拟南芥水稻棉花等）、动物（斑马鱼灵长类等）、微生物(酵母细菌真菌等）昆虫（果蝇蚕等）
分离蛋白大小: 磷酸化蛋白的分离范围在十几到220kDa，文献报道可分离350kDa的磷酸化蛋白
准备的试剂和仪器: 10mM的MnCl2溶液，固体产品需要溶解于甲醇中,其余与常规SDS-PAGE相同
各包装可做实验次数: 2mg包装20μM可制约20块胶，50μM约8块；10mg包装20μM可制100块胶，50μM约40块
凝胶染色: 考马斯亮蓝、银染、荧光染色、阴性染色

◆相关产品

产品名称	用　　途
Phos-tag™ Acrylamide	分离: SDS – PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白
SuperSep Phos-tag™	分离: 预制胶中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide
Phos-tag™ Biotin	检测: 代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体
Phos-tag™ Agarose	纯化: 通用柱层析，纯化磷酸化蛋白
Phos-tag™ Mass Analytical Kit	分析: 用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析，提高磷酸化分子的检测灵敏度

Phos-tag Acrylamide（丙烯酰胺）

产品编号	生产商编号	产品名称	规格	Phos-tag在配制胶中的浓度
产品编号	生产商编号	产品名称	规格	20μM	50μM	100μM
304-93526	AAL-107S1	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution	0.3mL	约10块	约4块	约2块
300-93523	AAL-107M	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107	2mg	约20块	约8块	约4块
304-93521	AAL-107	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107	10mg	约100块	约40块	约20块

SuperSep Phos-tag™ （丙烯酰胺预制胶）

产品编号	产品名称	产品规格
193-16711	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well Phos-tag 13孔10%预制胶	5块
190-16721	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well Phos-tag 17孔10%预制胶	5块
195-16391	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well Phos-tag 13孔12.5%预制胶	5块
193-16571	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well Phos-tag 17孔12.5%预制胶	5块
193-16691	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well Phos-tag 13孔15%预制胶	5块
196-16701	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well Phos-tag 17孔15%预制胶	5块
197-16851	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well Phos-tag 13孔17.5%预制胶	5块
194-16861	SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well Phos-tag 17孔17.5%预制胶	5块
198-17981	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm Phos-tag™ 预制胶，BioRad型	5块
195-17991	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm Phos-tag™ 预制胶，BioRad型	5块
192-18001	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型	5块
199-18011	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型	5块

Phos-tag™ Biotin（生物素）

产品编号	生产商编号	产品名称	规格
301-93531	BTL-104	Phos-tag™ Biotin BTL-104	10mg
308-97201	BTL-111S1	Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution	0.1ml

Phos-tag™ Agarose（琼脂糖）

产品编号	生产商编号	产品名称	规格
302-93561	AG-501	Phos-tag™ Agarose	0.5ml
308-93563	AG-503	Phos-tag™ Agarose	3ml

Phos-tag™ Mass Analytical Kit（质谱分析试剂盒）

产品编号	生产商编号	产品名称	规格
305-93551	MS-101KIT	Phos-tag™ Mass Analytical Kit	1 set

SuperSep Phos-tag™ 预制胶即开即用！
phos-tag™ 由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发。
SuperSep Phos-tag™ 是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phos-tag™ Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的结果条带也很整齐。

板大小	100 x 100 x 3 (mm)
凝胶大小	90 x 85 x 1 (mm)
孔数	13	17
孔容积	30 μL	25 μL
Phos-tag™浓度	50 μmol/L
丙烯酰胺浓度	10%、12.5%、15% 和17%
ZnCl₂浓度	100 μmol/L

◆优点、特色
·即开即用
·预制胶使用安全
·可长期保存（6个月）
·操作与普通SDS-PAGE一样

◆案例、应用
电泳条件：30 mA（恒电流）, 60分钟
样品：5 ug/Lane α-酪蛋白（含磷酸化与去磷酸化α-酪蛋白）（产品编号038-23221）
普通SDS-PAGE只观察到一条条带，而Phos-tag™ SDS-PAGE里可见α-酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化两条
条带。
样品缓冲液：Sample Buffer Solution (2ME+) (X4) (产品编号191-13272)
电泳缓冲液：SDS-PAGE 缓冲液, pH8.5(产品编号192-16801)
染色：QUICK CBB PLUS(产品编号174-00553)
P10%(左) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13well
P15%(中) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13well
A15%(右) : SuperSep™Ace, 15%, 13well （不含Phos-tag™）

◆相关产品

产品编号	产品名称	规　　格
058-07681	EasySeparator <配套电泳槽>	1 套
230-02461	Wide-View Prestained Protein Size Marker III (11~245kDa)	500 μL (200 次)
038-23221	α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated	1 mg

◆具体实例

1. 体外激酶反应，激酶和底物都带有标签，反应后亲和层析法纯化获得激酶和底物，如何检测底物的磷酸化情况？

如果底物和激酶分子量差别大，通过正常的SDS-PAGE能够区分，建议使用Phos-tag^TM Biotin。将激酶和底物进行免疫印迹实验，用Phos-tag^TM Biotin作为抗体检测底物的磷酸化基团（需记录底物的条带位置）。可通过剥离（strip）方式剥离Phos-tag^TM Biotin，用底物的非磷酸化抗体进一步验证其位置。

如果底物和激酶分子量差别不大，可进行Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE实验,然后转膜，用底物的非磷酸化抗体检测（没有使用激酶的抗体，所以检测不到激酶的带）。在Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE中磷酸化和非磷酸化底物发生分离，用底物的非磷酸化抗体可以检测所有底物。免疫印迹实验后，观察所有的条带，非磷酸化底物由于没有和Mn2+-Phos-tag^TM Acrylamide结合，所以迁移速度较快，磷酸化底物则迁移速度变慢。通过迁移率的变化，分析磷酸化底物的含量。

备注：

1） Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE实验中，建议使用α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated（038-

23221），该产品中含有磷酸化和非磷酸化的α-Casein，确保试剂和实验条件能够分离磷酸化蛋白。

2）如果没有非磷酸化底物，可使用Alkaline Phosphatase(for Biochemistry)（018-10693）对底物进行去磷酸

化反应。

2. 如何检测EGF（表皮生长因子）刺激后细胞内MAPK的磷酸化水平？

收集EGF刺激的细胞，制备细胞裂解液作为样品。进行正常的SDS-PAGE实验和Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE实验，转膜后用MAPK的非磷酸化抗体作为一抗进行检测（检测所有的MAPK，包括磷酸化和非磷酸化）。正常SDS-PAGE实验中，磷酸化的MAPK和非磷酸化MAPK没有分离，而在Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE实验中磷酸化MAPK和非磷酸胡MAPK发生分离，所以转膜后，用MAPK抗体检测，可以看到分离的条带。比较正常的SDS-PAGE用MAPK抗体的免疫印迹实验和Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE用MAOK抗体的免疫印迹实验，多出来的条带就是磷酸化的MAPK。

备注：该实验的前提是EGF刺激后细胞内的MAPK发生磷酸化，细胞内包含磷酸化和非磷酸化的MAPK。如果刺激后细

胞内不含有磷酸化的MAPK，则无法用Phos-tag^TM Acrylamide分离磷酸化和非磷酸化MAPK。

3. 研究蛋白相互作用的实验中，构建带有不同标签的2种融合蛋白，共转染细胞，在细胞内发生磷酸化反应。通过不同标

签的亲和层析柱获得纯化的蛋白，是否可用Phos-tag^TM Agarose纯化，进行后续免疫共沉淀实验（Co-IP）实验？

Phos-tag^TM Agarose纯化磷酸化蛋白，采用高盐的洗脱方式，没有使用界面活性剂、还原剂、酸或者碱洗脱，蛋白不发生变性，可进行后续的Co-IP实验。

4. 检测的样品中含有两种磷酸化的蛋白，分子量很接近，如何使用Phos-tag^TM产品检测磷酸化？

如果样品中两种磷酸化蛋白的分子量很接近，通过正常的SDS-PAGE实验无法区分，建议使用Phos-tag^TMAcrylamide。进行Mn2+-Phos-tag^TM SDS-PAGE实验后用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测。

也可以使用Phos-tag^TM Biotin。进行正常SDS-PAGE实验后，先用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测，剥离（strip）后用Phos-tag^TM Biotin。如果磷酸化蛋白量少的　话，剥离（strip）会去除一些蛋白，可能会影响检测的效果。

5. 使用Phos-tag^TM Mass Analytical kit，样品中如果含有磷酸缓冲液是否有影响？

该试剂盒检测磷酸化蛋白和多肽的灵敏度较高，样品中含有的磷酸缓冲液会影响磷酸化蛋白与Phos-tag^TM 结合。

Phos-tag(TM) Acrylamide Phos-tag丙烯酰胺

发表于2016年3月3日由jinpanbio

Phos-tag(TM) Acrylamide Phos-tag丙烯酰胺

货号：300-93523; 304-93521; 304-93526
包装：2mg;10mg;0.3ml

英文名：Phos-tag Acrylamide

品牌：Wako

使用Phos-tag(TM) SDS-PAGE和Phos-tag Acrylamide分离磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白。

Phos-tag^™ 丙烯酰胺 Phos-tag^™ Acrylamide

使用Phos-tag^™ 进行磷酸化蛋白质的迁移率测定
– 使用丙烯酰胺标记的Phos-tag^™ 进行磷酸蛋白亲和电泳层析

Phos-tag^™ Acrylamide AAL-107
Phos-tag<sup>™</sup> Acrylamide

Phos-tag^™是由广岛大学高分子科学系开发的一种中性pH环境(生理pH)下的新型磷酸结合标记。Phos-tag^™ SDS-PAGE这种电泳方法可以同时分析磷酸化蛋白异构体和配对二价锰的非磷酸化蛋白，是一种使用Pho-tag^™琼脂糖用于分离，纯化和富集磷酸化蛋白质的全新方法。该方法只需在常规的SDS-PAGE胶中添加Phos-tag^™Acrylamide （Phos-tag^™ 丙烯酰胺）和锌离子或者锰离子即可实验。

Phos-tag^™磷酸化亲和电泳原理

Phos-tag 丙烯酰胺

Phos-tag^TM SDS-PAGE 特点：

■ 不含放射性元素，非荧光物质
■ 不同位点磷酸化修饰的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来
■ 操作过程与常规 SDS-PAGE相类似
■ Phos-tag ™ 的结合特异性与氨基酸种类、序列无关
■ Phos-tag ™ SDS-PAGE实验后，可进行常规的免疫印迹或者质谱实验，也可进行 2 维电泳
■ 可区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白
■ Phos-tag ™ 母液可稳定保存至少 3 个月

Phos-tag ™应用

Phos-tag Acrylamide - 上海金畔生物,专业的Phos-tag产品供应商

Phos-tag^™ 丙烯酰胺 Phos-tag^™ Acrylamide 相关产品

货号	厂商编号	产品名称	规格
304-93526	AAL-107S1	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107 5mM水溶液	0.3 ml （约0.9 mg）
300-93523	AAL-107M	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107	2 mg
304-93521	AAL-107	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107	10 mg

Phos-tag™ Acrylamide在配胶中的使用浓度

货号	产品名称	使用浓度
货号	产品名称	20uM	50uM	100uM
304-93526	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107 5mM水溶液	约10块	约4块	约2块
300-93523	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107	约20块	约8块	约4块
304-93521	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107	约100块	约40块	约20块

wako Phos-tag™ Acrylamide丙烯酰胺

Phos-tag™ Acrylamide

SDS-PAGE分离不同磷酸化水平的蛋白！

在不使用放射性同位素的情况下，利用Phos-tag™ SDS-PAGE即可分离不同条带中的磷酸化和非磷酸化蛋白。分离后的凝胶可用于Western blotting和质谱分析等后续实验。

Phos-tag™ SDS-PAGE操作简单，只需在常规SDS-PAGE胶中加入Phos-tag™ Acrylamide 和Mn²⁺或者Zn²⁺即可进行实验。在电泳过程中，磷酸化蛋白的磷酸基团与Phos-tag™中的二价金属离子相结合，降低其迁移速度，从而可区分磷酸化与非磷酸化蛋白。

上海金畔生物科技有限公司

服务热线:18301939375 QQ：3258089810 3259632176

Email: info@jinpanbio.com

◆原理

◆优点、特色

采用Phos-tag™ SDS-PAGE可轻松分离磷酸化蛋白

无任何放射性元素及化学标记！

可检测不同磷酸化水平的磷酸化蛋白

无需任何磷酸化抗体！

适用于内源性蛋白的磷酸化分析！

◆案例、应用

【使用Phos-tag™ SDS-PAGE的磷酸化/非磷酸化蛋白比较】

我推荐使用Phos-tag ™ ——东京大学研究院医学研究科小川觉之

Phos-tag ™ 是专为研究磷酸化蛋白而新开发出来的试剂。此产品使用方便，不但可用于体外实验，还能定量分析体内蛋白的磷酸化水平。Phos-tag ™ SDS-PAGE 可用于常规电泳实验，无需购买特殊设备，性价比高。传统蛋白磷酸化的研究需要特异的磷酸化抗体、RI 等其它试剂，操作复杂，花费大，且放射性元素会有安全隐患，而Phos-tag ™ 的出现恰恰可以弥补这些缺点，为磷酸化蛋白研究提供新的方向。

磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白利用Phos-tag ™ SDS-PAGE 的分离效果图

Lane 1 为非磷酸化蛋白，Lane 2-5 为磷酸化蛋白，各蛋白因磷酸化状态不同而条带迁移率也有所不同。

磷酸化/ 非磷酸化蛋白的数量比、磷酸化程度、磷酸化蛋白的丰度等都可根据条带迁移和条带浓度求得。

【资料提供】

日本东京大学研究生院医学系研究科

【二维电泳中的应用：分析hnRNP K 磷酸化异构体】

小鼠巨噬细胞J774.1 经LPS 刺激后，裂解细胞，经过免疫沉淀法分离得到hnRNP K。在二维电泳中，一维是IPG 胶，二维是Phos-tag ™ SDS-PAGE，可分离hnRNP K 的异构体。利用质谱仪，可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。

二维电泳

同一个等电点的位置上，不同位点发生磷酸化都可以被区分开来（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）

【参考文献】

Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics , Nov 2010; 10(21): 3884-95.

【结果提供】

横滨市立大学生命纳米系统科学研究科生物体超分子系统科学专业木村弥生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）理化学研究所RCAI 小原收

【EGF 刺激前后MAPK 磷酸化水平的变化】

常规SDS-PAGE 和Phos-tagTM SDS-PAGE 后迚行克疫印迹实验分析EGF 刺激的A431 细胞中MAPK 磷酸化水平。

摘自Kinoshita-Kikuta, E. et al., Mol.Cell. Proteomics. (2007)6: 356.

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	产品价格
304-93526	Phos-tag Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution Phos-tag 丙烯酰胺5mM水溶液	0.3mL	蛋白研究	–
300-93523	Phos-tag Acrylamide AAL-107 Phos-tag 丙烯酰胺	2mg	蛋白研究	–
304-93521	Phos-tag Acrylamide AAL-107 Phos-tag 丙烯酰胺	10mg	蛋白研究	–
134-15302	Manganese(II) Chloride Tetrahydrate氯化锰四水合物	25g	for Molecular Biology	–

wako磷酸化蛋白电泳试剂- Phos-tag (TM) Acrylamide

发表于2016年3月3日由jinpanbio

磷酸化蛋白电泳试剂——wako Phos-tag (TM) Acrylamide

什么是Phos-tag™

Phos-tag ™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子，结合特异性与氨基酸的种类和序列无关，无放射性，无需特意制备磷酸化抗体。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot 检测（Phos-tag ™ Biotin）、蛋白纯化（Phos-tag ™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag ™ Mass Analytical Kit）。

Phos-tag的基本结构：

1. Phos-tag™ Acrylamide

Phos-tag™ Acrylamide SDS-PAGE可根据迁移率不同，区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。该方法只需在常规的SDS-PAGE胶中添加Phos-tag™ Acrylamide和MnCl₂即可进行实验（制胶过程中添加，如需详细说明请联系我们）。

特点
# 非放射性元素，非荧光物质
# 磷酸化蛋白亚型可以在同一电泳道分离出多条带
# 操作简便，与常规SDS-PAGE蛋白电泳相似
# Phos-tag™ 的结合特异性与氨基酸种类、序列无关
# Phos-tag™ SDS-PAGE实验后，可进行常规的免疫组化、质谱等
# 性质稳定，溶于蒸馏水后可以稳定保存至少3个月
# 磷酸化和非磷酸化蛋白可以同时被分离检测
# 不同位点磷酸化修饰以及磷酸化程度不同的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来

原理

应用

1、黄色粘性油状物质；

2、在4度可保存至少一年；

3、Phos-tagTM与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合分离磷酸化和非磷酸化蛋白。

SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。

在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。

Phos-tag® Acrylamide可根据迁移率不同，区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。无放射性、非化学物质标记。不同位点磷酸化修饰的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来。

操作过程与普通SDS-PAGE相类似。Phos-tagTM的特异性结合与氨基酸种类、序列无关。

适用于免疫印迹、质谱分析等后续工作。可识别磷酸化和非磷酸化蛋白。

Phos-tagTM母液可稳定保存至少3个月。

可检测出具有不同磷酸基团数目的蛋白。无需特意制备磷酸化抗体。

产品编号	产品名称	规格	原价
304-93526	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution	0.3ml	2670
300-93523	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107	2mg	4450
304-93521	Phos-tag™ Acrylamide AAL-107	10mg	10680

Phos-tag Acrylamide (AAL-107) Wako Cat. #304-93521 (10 mg)]⇒ Protocol(点击进入下载)

Phos-tag Acrylamide (AAL-107) Wako Cat. #300-93523 (2 mg)]⇒ Protocol(点击进入下载)

References 参考文献：

“Recognition of phosphate monoester dianion by an alkoxide-bridged dinuclear zinc (II) complex”, E. Kinoshita, M. Takahashi, H. Takeda, M. Shiro, and T. Koike, Dalton Trans., 21, 1189-1193 (2004).

“Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, K. Takiyama, and T. Koike, Mol. Cell.
Proteomics, 5, 749-757 (2006).

“A single nucleotide polymorphism genotyping method using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Anal. Biochem., 361, 294-298 (2007).

“Label-free kinase profiling using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, Y. Aoki, E. Kinoshita, and T. Koike, Mol. Cell. Proteomics, 6, 356-366 (2007).

“Separation of a phosphorylated-His protein using phosphate-affinity Polyacrylamide gel”, S. Yamada, H. Nalkamura, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and Y. Shiro, Anal. Biochem., 360, 160-162 (2007).

“A mobility-shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike, Anal. Biochem., 378, 102-104 (2008).

“Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate-affinity SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, S. Yamada, H. Nakamura, Y. Shiro, Y. Aoki, K. Okita, and T. Koike, Proteomics, 8, 2994-3003 (2008).

“FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to turn on the Fanconi anemia pathway”, M. Ishiai, H. Kitao, A. Smogorzewska, J. Tomida, A. Kinomura, E. Uchida, A. Saberi, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, S. Tashiro, S. J. Elledge, and M. Takata, Nature Struct. Mol. Biol., 15, 1138-1146 (2008).

“Two-dimensional phosphate affinity gel electrophoresis for the analysis of phosphoprotein isotypes”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, Y. Aoki, S. Ohie, Y. Mouri, and T. Koike, Electrophoresis, 30, 550-559 (2009).

“Phosphate-affinity Gel Electrophoresis Using a Phos-tag Molecule for Phosphoproteome Study”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Current Proteomics, 6, 104-121 (2009).

“Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, H. Ujihara, and T. Koike, Proteomics, 9, 4098-101 (2009).

“Separation and detection of large phosphoproteins by using Phos-tag SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Nature Protocols, 4, 1513-21 (2009).

wako 125-05061赖氨酰肽链内切酶

发表于2016年3月3日由jinpanbio

wako 125-05061赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase
【产品详情】
赖氨酰肽链内切酶
品牌：WAKO 和光
级别：质谱级
赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase 125-05061 wako
英文品名：Lysyl Endopeptidase?, Mass Spectrometry Grade
货号：125-05061
规格：5×20 μg
应用：蛋白质组学。
用途：赖氨酰肽链内切酶，蛋白测序、质谱分析，多肽合成
赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase 125-05061 wako
【实验原理】
赖氨酰肽链内切酶是质谱分析前处理时最常用的蛋白分解酶即赖氨酰肽链内切酶，赖氨酰肽链内切酶可以特异性切除赖氨酸基团C 末端的多肽，赖氨酰肽链内切酶可用于蛋白测序分析和Lys-X 化合物的酶合成。
若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶，可更好地切断赖氨酸基团的多肽，增加多肽的数量。赖氨酰肽链内切酶已按照使用习惯做成小包装，是方便使用赖氨酰肽链内切酶的冷冻干燥品。
【产品特点】
赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase 125-05061 wako
1）赖氨酰肽链内切酶用于蛋白质谱分析：高特异性、高蛋白质消化率；
2）赖氨酰肽链内切酶能增加肽段数量、提高裂解效率；
3）赖氨酰肽链内切酶独立包装，20 μg/一支
【结果】表明Lep 酶解的错误裂解率最低。
Tp 酶解时加入Lep 后，错误裂解率有所降低，同时，赖氨酰肽链内切酶可以鉴定出更多的多肽。

	Tp	Lep	Lep +Tp
裂解位点	精氨酸和赖氨酸的C 端	赖氨酸的C端	精氨酸和赖氨酸的C端
错误裂解率( 错误裂解所占比例)	多(8 %)	很少(0 %)	少(3 %)
鉴定出的多肽数量	17	19	22

赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase 125-05061 wako
Lep+Tp 赖氨酰肽链内切酶切后，可以在m/z=2000 时得到吸收峰，而单独的Tp 酶切在m/z=2000 时没有吸收峰。该结果表明Lep 可以提高测序覆盖度。
赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase 125-05061 wako

WAKO 其他产品清单：

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

货号品名规格 Cas

012-01965 Alminium Oxide 500g –

012-08643 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B 1mL×5A –

013-08391 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H 5mL –

015-14461 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2 5mL –

015-25191 Anti Phosphorylated α-Synuclein, Monoclonal Antibody (pSyn#64) 50ul –

011-14463 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2 1mL×5A –

011-19365 2,2′-Azobis[2-(2-imidazolin-2-yl)propane]

Dihydrochloride 500g 27776-21-2

016-08641 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B 5mL –

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

016-20001 Anti Iba1, Rabbit (for Western Blotting) 50μg –

016-23281 Anti Rat P2X4, Monoclonal Antibody 50ug –

017-19362 2,2′-Azobis[2-(2-imidazolin-2-yl)propane] Dihydrochloride 25g 27776-21-2

018-08721 Agar, Powder 100g 9002-18-0

018-22021 Anti Mouse Ago2, Monoclonal Antibody 100μL –

019-03435 Ammonium sulfate 500g 7783-20-2

019-19741 Anti Iba1, Rabbit (for Immunocytochemistry) 50μg –

019-22291 Anti Olfactory Marker Protein, Goat 100μL –

021-02195 Boric acid 500g 10043-35-3

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

021-16201 BES-H2O2(Cell-impermeant) 1mg –

031-17601 Collagenase Type I 100mg 9001-12-1

032-08385 Citric Acid Monohydrate 500g 5949-29-1

032-15372 Casein Phosphopeptide 25g –

034-06363 N-Caprylic Acid 25mL 124-07-2

034-16111 Cefotaxime Sodium Salt 1g 64485-93-4

035-04595 Creatinine 500g 60-27-5

035-17604 Collagenase Type I 1g 9001-12-1

038-23221 α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated 1mg –

039-01335 Carboxymethyl Cellulose Sodium Salt 500g 9004-32-4

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

021-17801 BES-So-AM 1mg 936356-51-3

022-07985 γ-Butyrolactone 500mL 96-48-0

025-03195 Buffer Solution Standard (Phosphate pH Standard Equimolal Solution)

pH6.86 (25 degrees C) 500mL –

047-18863 Dexamethasone 100mg 50-02-2

049-18801 4′,6-Diamidino-2-phenylindole Dihydrochloride n-Hydrate 10mg 28718-90-3

058-07681 EasySeparator 1set –

025-03195 Buffer Solution Standard (Phosphate pH Standard Equimolal Solution)

pH6.86 (25 degrees C) 500mL –

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

019-08393 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H 5Ax1mL –

019-11941 Active Carbon-impregnated Silica Gel 10g –

019-19741 Anti Iba1, Rabbit (for Immunocytochemistry) 50μg –

025-15481 BES-Thio 1mg –

026-16371 BF-170 1mg –

027-01276 Benzyl Alcohol 500mL 100-51-6

028-03185 Buffer Solution Standard (Phthalate pH Standard Solution)

pH4.01 (25 degrees C) 500mL –

028-03185 Buffer Solution Standard (Phthalate pH Standard Solution)

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

pH4.01 (25 degrees C) 500mL –

028-03205 Buffer Solution Standard (Tetraborate pH Standard Solution)

pH9.18 (25 degrees C) 500mL –

077-03155 Gelatin 500g 9000-70-8

081-00136 Heparin Sodium 10mu 9041-08-1

088-00705 L-Histidine Hydrochloride Monohydrate 500g 5934-29-2

093-06471 Insulin, Human, recombinant 50mg –

097-06474 Insulin, Human, recombinant 1g 11061-68-0

120-04891 L-012 100mg –

125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 5×20μg –

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

129-02541 Lysyl Endopeptidase( R) 10AU – –

129-04861 LY 294002 5mg 154447-36-6

130-07871 Melibiose 5g 585-99-9

028-16211 BES-So (Cell-impermeant) 1mg –

028-17811 BES-H2O2-Ac 1mg –

029-16361 BF-168 1mg –

039-23511 CultureSure? Freezing Medium 100ml –

041-18861 Dexamethasine 1g 50-02-2

042-29445 Dibasic Sodium Phosphate Hydrate 500g 10039-32-4

043-22611 Dextran 200,000 100g 9004-54-0

064-05381 Fibroblast Growth Factor (basic)(FGFb / bFGF / FGF2),

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

Human, recombinant, Animal-derived-free 50ug 106096-93-9

071-02293 gamma-Globulin, from Human Serum 5g 9007-83-4

075-03075 Gellan Gum 500g 71010-52-1

131-00405 Magnesium Sulfate 500g 10034-, 99-8

136-03032 Methyl Red 25g 493-52-7

137-06085 Molecular Sieves 4A1/16 500g 70955-01-0

138-07872 Melibiose 25g 585-99-9

145-08221 Nuclease P1 500u 54576-84-0

162-09115 Polyethylene Glycol 4,000 500g 25322-68-3

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

163-03545 Potassium Chloride 500g 7447-40-7

164-21655 N/400 Potassium Polyvinyl Sulfate Solu 500mL 26837-42-3

191-01785 Trisodium Citrate Dihydrate 500g 6132-04-3

193-02041 Glycerol 2-Phosphate Disodium Salt n-Hydrate 100g 819-83-0

195-12854 Streptavidin, from Streptomyces avidinii 5mg 9013-20-1

195-16031 StemSure (R) Freezing Medium 100ml –

196-00015 Sucrose 500g 57-50-1

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

196-08675 Sodium Dodecyl Sulfate 500g 151-21-3

197-07485 Sodium Sulfate 500g 7757-82-6

199-02825 Sodium Dihydrogenphosphate Dihydrate 500g 13472-35-0

203-17561 Trichostatin A 1mg 58880-19-6

207-00055 L(+)-Tartaric Acid 500g 87-69-4

208-08385 1mol/l Triethylammonium Hydrogencarbonate Solution 500mL 15715-58-9

223-02112 VA-044 25g 27776-21-2

225-02111 VA-044 100g 27776-21-2

165-09105 Polyethylene Glycol 2,000 500g 25322-68-3

165-17035 Polyvinylpyrrolidone K 30 500g 9003-39-8

167-09045 Polyethylene Glycol 200 500g 25322-68-3

169-09125 Polyethylene Glycol 6,000 500g 25322-68-3

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

185-01003 Rifampicin 5g 13292-46-1

186-01114 all-trans-Retinoic Acid 50mg 302-79-4

189-01001 Rifampicin 1g 13292-46-1

190-05535 Trisodium Citrate Dihydrate 500g 6132-04-3

191-01665 Sodium Chloride 500g 7647-14-5

227-01071 Valproic Acid 5g 99-66-1

231-02011 Wetting Tension Test Mixture No.52.0 50mL –

232-01941 Wetting Tension Test Mixture No.42.0 50mL –

233-01971 Wetting Tension Test Mixture No.45.0 50mL –

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

234-02001 Wetting Tension Test Mixture No.50.0 50mL –

235-01931 Wetting Tension Test Mixture No.41.0 50mL –

235-02031 Wetting Tension Test Mixture No.56.0 50mL –

236-01961 Wetting Tension Test Mixture No.44.0 50mL –

238-01921 Wetting Tension Test Mixture No.40.0 50mL –

238-02021 Wetting Tension Test Mixture No.54.0 50mL –

238-02141 Wetting Tension Test Mixture No.73.0 50mL 7732-18-5

253-00513 Y-27632 5mg 331752-47-7

257-00511 Y-27632 1mg 331752-47-7

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

290-34251 Presep-C DNPH 20EA –

296-63801 LabAssay? Phospholipid 1300tests –

298-64101 Fructooligosaccharides standard set set –

302-93561 Phos-tag (TM) Agarose 0.5mL –

304-93521 Phos-tag (TM) Acrylamide AAL-107 10mg –

290-34251 Presep-C DNPH 20EA –

290-63701 LabAssay? Triglyceride 1000tests -2016-2-29

290-65901 LabAssay? Creatinine 500tests –

291-58601 Lab Assay ALP 900tests –

293-51601 Endotoxin Extracting Solution for LAL Test 10mL x 4 –

294-62001 DsDD cDNA Subtraction kit Wako 5tests –

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

294-63601 LabAssay? NEFA 750tests –

294-65801 LabAssay? Cholesterol 1000tests –

295-50201 DNA Extractor? Kit 50tests –

295-51301 Limulus ES-II Single Test Wako 25 tests –

295-73401 Fructooligosaccharides Set Set –

304-93526 Phos-tag (TM) Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3ml –

305-93551 Phos-tag? Mass Analytical Kit set –

308-93541 Phos-tag (TM) Biotin BTL-105 10mg –

308-93563 Phos-tag (TM) Agarose 3mL –

308-97201 Phos-tag Biotin BTL-1111 1mM Aqueous Solution 0.1000mL –

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

325-88521 Lipase PS Amano SD 10g –

298-65701 LabAssay? Glucose 1000tests –

300-93523 Phos-tag (TM) Acrylamide AAL-107 2mg –

301-93531 Phos-tag (TM) Biotin BTL-104 10mg –

301-99413 Phos-tagTM Biotin BTL-104 1mM Aqueous Solution[for Campaign] 0.1mL 753451-66-0

302-93522 Phos-tagTM Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution[for Campaign] 0.3mL 871839-54-2

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

631-00651 Cellmatrix Type I -A (Collagen, Type I, 3 mg/mL, pH 3.0) 20mL –

637-00653 Cellmatrix Type I -A (Collagen, Type I, 3 mg/mL, pH 3.0) 100mL –

638-01021 Endotoxin Standad /JPSE 10000un –

986-10001 Anti asialo GM1 (Rabbit), (014-09801) 1mL 617-45-8

Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

wako胡萝卜素标准品

发表于2016年3月3日由jinpanbio

wako胡萝卜素标准品

品牌	产品编号	产品名称	等级	规格	零售价(RMB)	CAS No.
	(生产商编号)
Wako	209-17281	Thapsigargin	for Cellbiology	1 mg	1350	67526-95-8
		毒胡萝卜素
Wako	205-17283	Thapsigargin	for Cellbiology	5 mg	5390	67526-95-8
		毒胡萝卜素
Wako	035-05531	β-Carotene	Wako Special Grade	1g	400	7235-40-7
		β-胡萝卜素
Wako	031-05533	β-Carotene	Wako Special Grade	10g	860	7235-40-7
		β-胡萝卜素
Biomol	BML-PE180-0005	Thapsigargin	–	5mg	3840	67526-95-8
		毒胡萝卜素
Alexis	ALX-460-004-G005	β-Carotene	–	5g	810	7235-40-7
		β-胡萝卜素
AdipoGen	AG-CN2-0003-M010	Thapsigargin (high purity)	–	10 mg	5530	67526-95-8
		毒胡萝卜素
AdipoGen	AG-CN2-0003-M005	Thapsigargin (high purity)	–	5 mg	3220	67526-95-8
		毒胡萝卜素
AdipoGen	AG-CN2-0003-M001	Thapsigargin (high purity)	–	1 mg	810	67526-95-8
		毒胡萝卜素
Wako	035-17981	α-Carotene Standard	for High Performance Liquid Chromatography	10mg	2860	7488-99-5
		α-胡萝卜素标准品
Wako	032-17991	β-Carotene Standard	for High Performance Liquid Chromatography	10mg	920	7235-40-7
		β-胡萝卜素标准品

wako HiPolypeptone （Polypeptone）多聚蛋白胨

发表于2016年3月3日由jinpanbio

wako HiPolypeptone （Polypeptone）多聚蛋白胨

同义名：Hipolypepton；Polypepton；Casein Peptone；多聚蛋白胨；高聚蛋白胨；聚蛋白胨；酪蛋白胨；

HiPolypeptone (Polypeptone) 多聚蛋白胨日本制药株式会社 392-02115

生厂商：Nihon Pharmaceutical Co. Ltd. 日本制药株式会社（隶属于Takeda Pharmaceutical Group 武田制药株式会社）

基本描述：

HiPolypeptone (Polypeptone) 多聚蛋白胨用作微生物培养用，可配置各种微生物培养基，用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定。以及无菌实验培养基，厌氧菌培养基等细菌生化特性实验用培养基的配置。

产品特点：

制造工艺：对主原料（酪蛋白）经酶分解，经过滤、浓缩、提纯，干燥而得的粉末；

原料来源：新西兰产地（未发生疯牛病）的酪蛋白；

工艺严控：本品由日本四大药业之一的Nihon Pharmaceutical生产，严格按照日本药局方的药品生产规范制备；

质控标准：

外观	Grayish yellow powder
溶解性（5% 水溶液)）	Clear Solution
重金属（如Pb）)	≤1ppm
干燥失重	≤6.0%
炽灼残渣	≤10%
总氮（T-N）	≥11%
氨基酸氮( A-N)	5~7%

订购信息：原装正品，现货供应。欢迎来电咨询上海金畔生物科技有限公司

品牌	货号	名称	规格	价格（元）
日本制药株式会社	392-02115	HiPolypeptone 多聚蛋白胨	500g	咨询

日本进口wako多聚蛋白胨Hipolypepton

品牌：	日本制药
货号：	392-02115，392-02117
保存条件：	室温
供应商：	Wako
规格：	500g/20kg

规格：	500g	产品价格：	询价
规格：	20kg	产品价格：	询价

上海金畔生物供应日本制药的多聚蛋白胨系列产品，包括以新西兰产地的酪蛋白为原料的培养基“酪蛋白胨”，和以大豆为原料的“酪蛋白胨S”“酪蛋白胨N”“酪蛋白胨NS”。
品名：多聚蛋白胨
英文名称：Hipolypepton

品牌：	日本和光纯药
货号：	392-02115，392-02117
保存条件：	室温
供应商：	Wako
规格：	500g/20kg

规格：	500g	产品价格：	询价
规格：	20kg	产品价格：	询价

本系列是将主原料进行酶分解后，提纯、干燥而成的粉末。“Hipolypepton”（酪蛋白胨）的原料酪素钠仅使用未发生过疯牛病的新西兰产区的牛。可配制各种微生物培养基，用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定，以及无菌试验培养基、厌氧菌培养基等细菌生化特性试验用培养基的配置。

胰蛋白胨还广泛应用于高品质的抗生素、维生素、医药工业，氨基酸、有机酸、酶制剂、黄原胶等发酵工业，生化制品及微生物学科研等领域中。临床用于抗炎消肿，工业上用于皮革制造，生丝处理，食品加工。

酪蛋白胨

产品名称		酪蛋白胨
规格		500g	20kg
产品编号		392-02115	398-02117
价格		590	咨询
主原料		酪素钠
酶		动物酶
制造方法		主原料一酶分解一过滤一浓缩一干燥一分装
X产品性质	性状	外观	淡黄白色一淡黄褐色的粉末
		气味	气味特别，但无腐臭
		溶液澄清度及色泽	淡黄色一黄色澄洁
	干燥减量		6%以下
	炽灼残渣		10%以下
	总氮（T-N）		11%以上
	氨基酸氮( A-N)		5-7%

大豆蛋白胨

产品名称

酪蛋白胨S

酪蛋白胨N

酪蛋白胨NS

规格

500g

20kg

300g

10kg

300g

10kg

产品编号

394-02175

390-02177

397-02121

395-021 27

393-02101

301·02107

价格

700

咨询

540

咨询

700

备询

主原料

脱脂大豆

大豆萃取物

脱脂大豆

酶

动植物酶

微生物酶

制造方法

主原料一酶分解—过滤—浓缩—干燥—分装

产品性质

性状

外观

淡黄白色。淡黄褐色的粉末

气味

气味特别，但无腐臭

溶液澄清度丑色泽

淡黄色·黄色澄清

淡黄色·褐色澄清

淡黄色澄清

干燥减量

6%以下

9%以下

炽灼残渣

23%以下

15%蹦下

23%以下

总氨( T-N)

7%以上

12%以上

7%以上

氨基酸氮( A-N)

3-5%

5-7%

3-5%

产品编号	产品名称	规格
392-02115	酪蛋白胨	500g
398-02117	酪蛋白胨	20kg
394-02175	酷蛋白胨S	500g
390-02177	酷蛋白胨S	20kg
397-02121	酪蛋白胨N	300g
395-02127	酪蛋白胨N	10kg
393-02101	酪蛋白胨NS	300g
391-0210/	酪蛋白胨NS	10kg

产品编号	产品名称	规格
394-02131	酵母浸出粉SH	250g
392-02137	酵母浸出粉SH	10kg
398-02151	酵母浸出粉D-3H	250g
396-02157	酵母浸出粉D-3H	10kg
393-02167	酵母浸出粉FH	10kg
393-02145	酪蛋白氨基酸“DAIGO’	500g
399-02147	酪蛋白氨基酸“DAIGO’	10kg

wako NK细胞抑制剂

发表于2016年3月3日由jinpanbio

Anti Asialo GM1(Anti AsGM1)

本产品只能用于研究，不能用于人的治疗。

◆原理介绍

Anti Asialo GM1(Rabbit)抗血清可以减少大鼠或者小鼠来源的自然杀伤细胞（NK细胞）的活性，NK细胞是免疫监视细胞。该抗体可以与NK细胞发生特异性结合，从而抑制NK细胞非特异性杀伤靶细胞的活性。靶细胞包括肿瘤细胞、同种异体移植的器官、组织等。可运用于药物筛选，器官移植，自身免疫疾病等研究。

每个产品有具体的体内外的滴定数据。

◆注射方法

小鼠-静脉注射：10-50μL（推荐20μL）具体剂量由滴度和规格而定。第一次注射在4天内有效，因此两周内需要注射3-4次。

大鼠-静脉注射：50-250μL（小鼠剂量的4或5倍）具体剂量还须考虑大鼠的健康状况、体重和NK活性。

小鼠和大鼠-腹腔给药：同等剂量或多于静脉注射。

◆产品信息

制备：	从牛脑组织里提纯的Asialo GM1与甲基化牛血清白蛋白和弗氏完全佐剂一起使用，可进行反复免疫。用含有磷酸缓冲盐水（ph7.2）的50%硫酸铵透析后，得到血清里的丙种球蛋白（Gammaglobulin）片段。
内容：	含有唾液酸抗体GM1的兔血清50%硫酸铵盐析分层物（含蛋白量约10mg/mL）。
提纯法：	50%的硫酸铵盐析后，用含有磷酸缓冲液的生理盐水透析，然后冻干。
特异性：	作用于小鼠和大鼠的自然杀伤细胞；小鼠单核细胞（是一种不含自然杀伤细胞、骨髓、胎儿肝细胞和裸鼠脾脏巨噬细胞的肝细胞）；小鼠胎儿胸腺细胞（12日龄；生存率不断降低直到没有出现新生小鼠）（备注：如果浓度高，也能作用于成熟的T淋巴细胞）
免疫球蛋白类型：	IgG、IgA和IgM
重组：	建议用蒸馏水（1mL）。由于该产品是使用盐来进行冻干的，如果用其它溶剂如PBS或MEM，就能增加其盐浓度。
抗体滴度：	通过免疫凝聚实验得出结果，抗体滴度比例约1 : 1,000
保存方法：	存储在2~10℃下
包装规格：	1mL样瓶
形状：	干冻品

◆应用案例

适用的动物模型	运用
肿瘤动物模型	与抗肿瘤药物混合后注入肿瘤动物模型内，研究抗肿瘤药物的作用机理。
肝纤维化动物模型	与治疗肝纤维化的药物混合后注入动物模型体内，研究抗肝纤维化药物的作用机理。
器官移植动物模型	器官移植后，会产生免疫排斥反应，机体内的免疫监视会清除”异己“的细胞和器官。可用于研究器官移植后使用的免疫抑制剂的作用机理
自身免疫疾病动物模型	研究治疗自身免疫疾病药物的作用机理。
干细胞动物模型	抑制NK细胞的活性，从而有利于干细胞动物模型的建立。
糖尿病动物模型	研究炎症与糖尿病的关系。

NK细胞抑制剂——Anti Asialo GM1(Anti AsGM1)(兔源)

Anti Asialo GM1的抗血清可以与NK细胞（自然杀伤细胞）结合，抑制NK细胞非杀特异性杀伤靶细胞的活性。靶细胞包括肿瘤细胞，同种异体移植的器官、组织等。可用于药物筛选、器官移植、自身免疫疾病研究等。NK细胞属于天然免疫细胞，具有免疫监视功能。

特异性：与小鼠、大鼠的NK细胞，小鼠单核细胞（不含有NK细胞的肝脏细胞；骨髓；胎儿肝脏细胞；裸鼠巨噬细胞的脾细胞），胎儿T淋巴细胞（12天）

研究糖尿病的免疫治疗：

据报道，抗细胞凋亡细胞因子IL-15具有促进NK细胞和T细胞（包括调节性T细胞，Tregs）存活和激活上述两种细胞活性的功能。在患有糖尿病的NOD小鼠体内反复注射IL-15。如果每天一次，注射2周，既不抑制也不加速未处理NOD小鼠患糖尿病的情况。但是NK细胞活性丧失的NOD小鼠注射IL-15可以明显减少糖尿病的发病率和延迟糖尿病发病时间，但是NK细胞活性丧失不注射IL-15的小鼠依然病发糖尿病。在用IL-15处理，NK细胞活性丧失的NOD小鼠体内产生的保护效应与CD4+CD25+ Tregs免疫抑制活性增加有关。在该项实验中，用Anti AsGM1注射小鼠，抑制NK细胞活性，导致NOD小鼠NK细胞活性缺失。

摘自：Jinxing Xia et al., Clinica l Immunology.(2010) 134, 130–139

研究败血症中NK细胞的功能

NK细胞和NKT细胞都属于天然免疫系统，但在细菌引起的败血症中这两种细胞的作用是有争议。用Anti Asialo GM1处理小鼠，成为NK细胞活性抑制的小鼠；用CD1d单抗处理小鼠，成为NKT细胞活性抑制的小鼠；同时用同型对照单抗处理小鼠，作为阴性对照。之后这些小鼠感染肺炎链球菌。分析血清和组织样品中细菌的含量，细胞因子，脾细胞凋亡率、用流式鉴定细胞，同时也分析脾细胞miRNA的表达。结果发现NK细胞活性抑制的小鼠延长了存活率。一旦NKT细胞激活抑制，与其他细胞群相比，脾脏的NK (CD3−/NK1.1+)细胞数目增加。NKT细胞活性抑制导致小鼠体内的细菌含量升高，导致血清和脾细胞IFN-γ水平升高。抗CD1d处理小鼠的脾细胞miRNA分析显示miR-200C和miR-29a下调，miR-125a-5p上调。这些变化发生在NK细胞活性抑制后。NK细胞可能与肺炎球菌肺炎的死亡率有关。抑制NKT细胞的激活导致(CD3−/NK1.1+)细胞数目增加，IFN-γ水平升高，改变脾细胞miRNA表达。

摘自Eirini Christaki et al., Journal of Immunology Research, Volume 2015 (2015), Article ID 532717, 10 pages

研究肿瘤的免疫治疗

肿瘤的发展过程包括血管新生，肿瘤尺寸增大和肿瘤转移。使用CXCL14/BRAK (CXCL14) 转基因小鼠研究过度表达的CXC趋化因子配体14 (CXCL14) 在上述生物学现象中的作用。与野生型小鼠相比，转基因小鼠经AOM/DSS诱导的结肠血管新生的发病率显著低很多。肿瘤细胞注射到这些小鼠后，肿瘤尺寸发生变化。与野生型的相比，转基因小鼠肺中转移小瘤的数目明显少，

肿瘤的尺寸也明显变小。在注射肿瘤前后注射Anti Asialo GM1减少了CXCL14在肿瘤生长方面和肿瘤转移的抑制效应，表明激活的NK细胞在CXCL14介导的抑制肿瘤生长和转移期间起重要作用。CXCL14也表达在B16黑色素瘤细胞内表明NK细胞在肿瘤转移方面的重要性。而且转基因小鼠在注射肿瘤细胞后的存活率显著增长。这些转基因小鼠没有明显的不正常，预计肿瘤抑制/预防方面CXCL14起着重要作用。

摘自：Hata R et al.,Scientific Reports(2015) 5 : 9083 | DOI: 10.1038/srep09083

动物模型	运用
肿瘤动物模型	与抗肿瘤药物混合后注入肿瘤动物模型体内，研究抗肿瘤药物是否通过激活NK细胞活性达到杀伤肿瘤细胞的作用。
肝病动物模型	与治疗肝病的药物混合后注入动物模型体内，研究药物是否通过激活NK细胞活性达到治疗肝病的效果。
器官移植动物模型	器官移植后会发生免疫排斥反应，机体内的免疫监视系统会清除：异己“的细胞和器官。可用于研究器官移植后免疫抑制剂的作用机理。
自身免疫疾病动物模型	研究治疗自身免疫疾病药物的作用机理。
干细胞动物模型	移植NK细胞活性，有利于干细胞动物模型的建立。

产品列表

产品编号	产品名称	等级	规格
014-09801(986-10001)	Anti asialo GM1 (Rabbit) NK细胞抑制剂	for Immunochemistry	1mL

230-01861 50ml 物体表面湿润张力测试液体No.34.0

发表于2016年3月3日由jinpanbio

230-01861 50ml 物体表面湿润张力测试液体No.34.0

表面湿润张力试验用混合液（Wetting Tension Test Mixture）ぬれ張力試験用混合液（ぬれ張力試験用）

表面湿润张力试验用混合液,用于“塑料薄膜及薄板表面湿润张力试验法”的试剂。

试验方法

用含有试剂的棉棒在试验材料（薄膜）上横向涂抹一次，必需注意涂上的混合液的量会极大影响试验的正确度。涂上试剂后2秒，判定液膜中央部分的状态。当液膜没有产生破裂时，判定为“可润湿”；产生破裂时，判定为“不可润湿”。

ぬれ張力試験用混合液 Wetting Tension Test Mixture 详细产品信息如下：

（ぬれ張力試験用）

（和光纯药Wako中国）另还常年供应以下表面张力的型号：

235-01791 No.22.6 50ml

238-01801 No.25.4 50ml

235-01811 No.27.3 50ml

232-01821 No.30.0 50ml

和光纯药WAKO：Wetting Tension Test Mixture No.34.0 物体表面湿润张力测试液体No.34.0 230-01861 50ml
239-01831 No.31.0 50ml

236-01841 No.32.0 50ml

233-01851 No.33.0 50ml

237-01871 No.35.0 50ml

234-01881 No.36.0 50ml

231-01891 No.37.0 50ml

234-01901 No.38.0 50ml

231-01911 No.39.0 50ml

238-01921 No.40.0 50ml

235-01931 No.41.0 50ml

232-01941 No.42.0 50ml

239-01951 No.43.0 50ml

236-01961 No.44.0 50ml

239-01971 No.45.0 50ml

230-01981 No.46.0 50ml

237-01991 No.48.0 50ml

234-02001 No.50.0 50ml

231-02011 No.52.0 50ml

238-02021 No.54.0 50ml

235-02031 No.56.0 50ml

和光纯药WAKO：Wetting Tension Test Mixture No.34.0 物体表面湿润张力测试液体No.34.0 230-01861 50ml
232-02041 No.58.0 50ml

239-02051 No.59.0 50ml

236-02061 No.60.0 50ml

233-02071 No.61.0 50ml

230-02081 No.62.0 50ml

237-02091 No.63.0 50ml

230-02101 No.64.0 50ml

237-02111 No.65.0 50ml

234-02121 No.67.0 50ml

231-02131 No.70.0 50ml

238-02141 No.73.0 50ml

Cyitva whatman沃特曼

滤纸滤膜滤器Millipore密理博PALL颇尔中国代理商金畔官网

月度归档：2016年03月

wako 用于磷酸化蛋白的WB检测– Phos-tag™ Biotin

【Phos-tag™ Biotin免疫印迹原理】

wako 193-16711-SuperSep Phos-tag™ 预制胶

wako 193-16711-SuperSep Phos-tag™ 预制胶（蛋白磷酸化研究）

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

◆具体实例

Phos-tag(TM) Acrylamide Phos-tag丙烯酰胺

wako Phos-tag™ Acrylamide丙烯酰胺

wako磷酸化蛋白电泳试剂- Phos-tag (TM) Acrylamide

wako 125-05061赖氨酰肽链内切酶

wako胡萝卜素标准品

wako HiPolypeptone （Polypeptone）多聚蛋白胨

wako NK细胞抑制剂

230-01861 50ml 物体表面湿润张力测试液体No.34.0

230-01861 50ml 物体表面湿润张力测试液体No.34.0